刘洋，袁利学，步雪峰，严玉兰

(1.江苏大学附属人民医院呼吸科，江苏镇江212002;2.黄石市中心医院重症医学科，湖北黄石435000)

2003 年 Sheppard等［1］和 Otenko等［2］相继报道了 IFN-λ 家族，包括 IFN-λ1、IFN-λ2 和 IFN-λ3 3 个成员(又称IL-29、IL-28A 和IL-28B)。IFN-λs具有与Ⅰ型干扰素类似的信号转导通路，从而发挥抗病毒、抗细胞增殖和免疫调节等生物学作用［3］。近来众多研究表明IFN-λs在体内外均具有抗肿瘤细胞生长作用［4－6］。因此，本实验构建鼠 IFN-λ2 重组腺病毒载体，为后续进一步开展抗肿瘤的研究及基因治疗奠定良好的基础。

1 材料和方法

1.1 材料

引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成;内切酶购自TaKaRa公司;T4DNA连接酶购自MBI公司。质粒中量提取试剂盒购自Qiagen公司;转染试剂LipofectaminTM2000购自Invitrogen公司;pShuttle-CMV载体、腺病毒的骨架载体、BJ5183菌、pAdEasy，人胚肾293A细胞由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供。LA795鼠肺腺癌细胞购自北京协和细胞资源中心。

1.2 方法

1.2.1 鼠脾脏细胞制备 BALB/c鼠1只，无菌取出脾脏，剥离结缔组织，用不完全培养液清洗后将脾脏经200目纱网研磨过滤成单个细胞，将脾细胞悬液移至离心管中，800 r/min离心10 min，沉淀用不完全培养液再离心洗涤1次，将细胞沉淀用含5%胎牛血清的DMEM重悬，移至细胞培养瓶，37℃ 5%CO2培养箱培养。

1.2.2 引物设计 按基因库报告的mIFN-λ2基因全长序列设计引物，上游引物:5'-GGTACCATGCTCCTCCTGCTGTTGCCTCTGCTGCTGGCCGC-3'，下游引物:5'-AAGCTTTCAGACACACTGGTCTCCACTGGCCACACAC-3'上游引物中引入KpnⅠ位点，下游引物中引入HindⅢ位点。

1.2.3 鼠IFN-λ2基因的RT-PCR克隆 用人水疱口炎病毒按感染复数(multiplicity of infection，MOI)1.0感染鼠脾脏细胞12 h后，Trizol法提取小鼠脾脏细胞的总RNA，以Oligod T为反转录引物用Invitrogen反转录试剂盒反转录成cDNA模板进行PCR，PCR的循环条件:95℃ 热启动预变性5 min，95℃30 s，58℃ 30 s，72 ℃50 s，共 30 个循环，72 ℃ 延伸10 min，对扩增产物进行10 g/L琼脂糖电泳分析。……