惠璐璐，许文林，沈慧玲，陈巧云，朱小兰，龙璐璐，徐颖

(江苏大学附属人民医院中心实验室，江苏镇江212002)

MicroRNAs是1993年Lee等［1］在线虫发育的研究中首先发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，长约21～24个核苷酸。它通过干扰mRNA的翻译而下调靶基因的表达，能够对基因表达进行微调，参与生命过程中一系列的重要进程，包括早期发育、细胞增殖、细胞凋亡等［2］。近年来，越来越多的研究表明，microRNAs能够影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性［3］。有研究证明，抑制microRNA21表达能增强白血病细胞对化疗药物的敏感性［4］。

前期研究发现［5］，雷公藤甲素(triptolide，TPL)是从中药雷公藤中提取的环氧化二萜内酯化合物，对K562/A02细胞中microRNA21表达有下调作用。本实验旨在探讨TPL提高K562/A02化疗敏感性相关机制，为临床白血病多药耐药的逆转提供一条新的思路。

1 材料和方法

1.1 材料

人慢性髓系白血病细胞株K562及其耐药株K562/A02购于中科院上海细胞库。K562细胞、K562/A02细胞置于含10%小牛血清的RPMI1640培养液，37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中常规培养，2～3 d换液1次，K562/A02细胞培养液中含多柔比星(doxorubicin，DOX)终浓度为 1.0 μg/ml以维持其耐药性，实验前脱药培养2周，取对数生长期的细胞进行实验。多柔比星为浙江海正制药厂产品。噻唑蓝(MTT)为Sigma公司。雷公藤甲素购自美国Sigma公司，RPMI1640培养基、胎牛血清均购自美国GibcoBRL公司。AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒购自美国Biovision公司。PI试剂盒购自Sigma公司，4℃保存。SYBR Green荧光定量PCR试剂盒购自大连宝生物公司。

1.2 方法

1.2.1 MTT法检测TPL的细胞毒性 取对数生长期的细胞调整细胞浓度为2×105/ml，接种于96孔培养板，每孔加……