HPLC-UV法快速检测食品中的环己基氨基磺酸钠

2012-11-17福建省福清市质量计量检测所福建福清350300

长江大学学报(自科版) 2012年5期

杨玉(福建省福清市质量计量检测所，福建福清 350300)

杨玉(福建省福清市质量计量检测所，福建福清 350300)

探讨了采用HPLC法快速检测食品中的环己基氨基磺酸钠的条件和方法。结果表明，采用XB-C18柱(5μm,25mm×4.6mm)，紫外检测器，检测波长为314nm，流动相为甲醇∶水为95∶5，流速为1ml/min，柱温25℃，进样量为20μl,在样品中环己基氨基磺酸钠含量为 2.0～50.0μg/ml的范围内，峰面积与环己基氨基磺酸钠具有良好的线性关系，相关系数为0.9994，加标回收率为95.6%～99.4% ,相对标准偏差为3.45%。该方法准确、快速。

高效液相色谱法；食品；快速；环己基氨基磺酸钠

环己基胺基磺酸钠又名甜蜜素，是赋予食品甜味的食品添加剂,属于人工合成的磺胺类无营养性食品甜味剂。近年来随着对甜蜜素的毒理学研究的深入,表明其代谢产物环己胺可能具有潜在的致癌性。许多国家禁止或限制使用，我国目前允许环己基胺基磺酸钠的使用，但列入限制使用的食品添加剂，在GB2760-2011中规定冷冻饮品、糕点、饮料中添加量最多不超过0.65g/kg[1]。目前我国食品中环己基氨基磺酸钠检测采用的3种方法即气相色谱法、比色法和薄层层析法[2]。但是采用气相色谱法检测要使用冰浴进行温度控制，很容易因为季节和环境温度的影响导致实验失败，而且这些方法操作过于繁琐、费时，不利于快速分析测定。为此，本研究参考国内外的相关文献[3-4]，探讨了采用HPLC法对食品中的甜蜜素进行快速分离和检测的方法。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

L-2000日立液相色谱仪及紫外检测器(自动进样)；艾科浦超纯水机；上海精科涡旋混合器；BS224S赛多利斯电子分析天平(感量0.1mg)；湖南湘仪实验室仪器开发有限公司H1650台式高速离心机；溶剂过滤器(带0.45μm有机系过滤膜和真空泵)。

甲醇(色谱纯)；重蒸水；乙腈(色谱纯)；乙酸胺；1∶1硫酸溶液；1∶1次氯酸钠溶液；正己烷；5%碳酸氢钠溶液。其余试剂均为分析纯。

1.2 色谱分析条件

色谱柱：XB-C18柱(5μm,250mm×4.6mm)；柱温25℃；流动相：乙腈∶水(70∶30)，甲醇∶水(95∶5)，0.02mol/L的乙酸胺∶甲醇(90∶10)；流速：1ml/min；进样量：20μl；检测波长：314nm。

1.3 标准品的制备

准确称取0.1000g甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)标准物质(中国计量科学研究院，含量≥99.0%)，加水溶解并定容至100ml，得浓度为1.00mg/ml的储备液,置于-4℃的冰箱中备用。

分别准确吸取0.2、0.5、1.0、2.0、5.0ml标准储备液于100ml容量瓶中用蒸馏水定容至100ml，得分别含有甜蜜素2、5、10、20、50μg/ml的甜蜜素的标准工作液。

分别用离心管称取标准溶液各10ml，加1∶1硫酸溶液2ml和正己烷10ml，再加入1ml 1∶1次氯酸钠溶液，涡旋震荡提取2min，然后离心4000r/min,10min，称取正己烷层至另一离心管中，加入25ml 5%的碳酸氢钠溶液，震荡离心，分层后，用一次性注射器吸取上清液经0.22μm有机滤膜过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。

1.4 试样的制备

若是固体，称取固体试样10g稀释10倍，处理成液体样品，用离心管称取液体样品10ml，样品处理过程同1.3标样衍生化处理方法。

1.5 回收率和精密度测定

实验室称取6个不含环己基氨基磺酸钠的样品，作为加标回收实验的样品，用移液管分别加入2.00mg/ml标准溶液2、5、10、20、40、50ml，按上述样品前处理和液相色谱操作条件测定回收率。从同一样品中称取6个试样，按样品衍生方法进行处理后，按上述液相色谱操作条件测定环己基氨基氨基磺酸钠含量。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 检测波长的选择

经试验，检测波长选择在314nm时，检测杂峰少，检测结果满意。

2.1.2 流动相的选择

通过试验比较发现，甲醇和乙酸胺水溶液作为流动相时，基线噪声较大且倒峰离甜蜜素较近，影响积分；甲醇和水作为流动相与乙腈和水作为流动相比例为80∶20、90∶10和95∶5时，分离情况基本是相同的。但考虑到乙腈对人身安全存在更大威胁，故本研究选择采用对人体影响更小、更为便宜的甲醇和水作为流动相。同时比较可知，流动相甲醇∶水为95∶5为最佳出峰时间。

2.1.3 色谱柱和检测器的选择

图1 环己基氨基磺酸钠标准品色谱图

图2 环己基氨基磺酸钠加标样品色谱图

采用XB-C18柱( 5μm,250mm×4.6mm)，柱温25℃，紫外检测器，检测波长为314nm，流动相甲醇为水为95∶5，流速为1ml/min，进样量为20μl,经试验发现，保留时间在5.45min左右，标准与加标样品分离效果很好(图1、图2)。

图3 环己基氨基氨基磺酸钠标准校正曲线

2.2 标准校正曲线的线性范围

按所选择的色谱条件进样不同质量浓度的标准溶液20μl，获得不同质量浓度下各组分的峰面积，以标准溶液浓度为横坐标x，以环己基氨基磺酸钠响应值峰面积为纵坐标y,以质量浓度和峰面积绘制标准曲线，如图3所示。由图3可知，在样品中环己基氨基磺酸钠含量为 2.0～50.0μg/ml的范围内，峰面积与环己基氨基磺酸钠具有良好的线性关系，回归方程为y=2007x-559.39,相关系数R2=0.9994。

2.3 回收率的测定

实验室称取6个不含环己基氨基磺酸钠的样品，作为加标回收实验的样品，用移液管分别加入2.00mg/ml标准溶液2、5、10、20、40、50ml，按上述样品前处理和液相色谱操作条件测定回收率。结果表明，其回收率在 95.6%～99.4%之间(表1)。

2.4 精密度的测定

从同一样品中称取6个试样，按样品衍生方法进行处理后，按上述液相色谱操作条件测定环己基氨基氨基磺酸钠含量，得到RSD(相对标准偏差)为3.45%。