红 梅 陈秋红 刘有菊 王志瑾

（1 青海省藏医药研究院药物研究所，青海 西宁 810003；2 青海高原医学科学研究所中心实验室，青海 西宁 810012）

藏药手参肾宝胶囊由手参、冬虫夏草、烈香杜娟等名贵药材科学提取藏秘炮制而成。藏药手参（又称手掌参）为藏医常用植物药，藏药名旺拉，始载于藏医药书《四部医典》，有填精补髓、滋阴益气、增强体质的功效，在历代藏医药著作《晶珠本草》《本草图鉴》中均有记载[1]。冬虫夏草是我国名贵中草药，主要用于阳痿遗精、腰腿酸软和肾功能衰竭等[2]。上述原辅料合用，从传统医学理论分析，藏药手参肾宝胶囊组方合理，对机体会产生补肾强体的作用。本文就其用药的安全性，进行了小鼠最大耐受实验及大鼠长期毒性实验给予初步评估，实验结果叙述如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药品与试剂

藏药手参肾宝胶囊由金诃藏药药业提供，成年人常规用量0.01g/（kg•d）实验前加蒸馏水制成一定浓度的混悬液，置冰箱备用。

1.1.2 实验动物

KM种小鼠、体质量18～22g，清洁级，均由青海省实验动物中心提供，合格证号：青医动字第零零一号；wista大白鼠体质量80～90g，由兰州大学实验动物中心提供，合格证号：0002400，雌雄各半，分笼饲养。

1.1.3 仪器

全自动生化分析仪Olympas-au640（日本）、血细胞分析仪KX-21N（日本）、电子天平、离心机、石蜡切片机、显微镜（北航医学图象分析管理系统）等。

1.1.4 统计学分析

各项指标均用组间比较进行显著性t检验，所有剂量资料以均数±标准差表示。

1.2 实验方法

1.2.1 急性毒性实验[3]

取健康昆明种小白鼠40只，雌雄各半，随机分为2组，分别为对照组和手参组。选用拟临床实验的给药途径—灌胃（ig），以小鼠能够耐受的最大浓度0.23g/mL、最大体积0.5mL的药量24h内连续3次给予小鼠，总剂量为17.25g/kg，相当于临床常规用药剂量的1725倍，对照组ig等体积蒸馏水，给药后检测行为、外观：毛色、尿色、粪便、活动情况、饮水和饮食量及检测给药前后2周体质量及抽取对照组和给药组雌雄各4只，处死、解剖，肉眼观察各脏器有无明显病变，主要观察各组织有无细胞变性、炎症和肿瘤的发生等病理学改变，并对典型病变予以照相记录。

1.2.2 长期毒性实验[4]

健康大白鼠128只，雌雄各半，随机分为4组，分别为空白对照组，手参肾宝胶囊低剂量组（0.25g/kg）、手参肾宝胶囊中剂量组（0.5g/kg）和手参肾宝胶囊高剂量组（1g/kg）（该剂量相当于临床拟日用药量的25、50、100倍）组，每组32只。ig给药，每天1次，共90d，在给药45d、90d和停药15d每组各处死10只，腹主动脉采血，检测行为、外观、毛色、尿色、粪便、活动情况、饮水和饮食量、每周体质量、相关血液指标，观察主要脏器的肉眼形态及病理组织学改变。

2 实验结果

2.1 小鼠最大耐受量

2.1.1 肉眼观察

手参肾宝胶囊首次灌胃后2h后发现雌性2只小鼠均出现竖毛，精神萎靡不振，活动减少，第二次给药时发现雌性4只小鼠有轻微腹泻，肛周少量污秽，末次给药雌雄各2只有竖毛、精神不振，无死亡；次日转为正常，未见其他明显的异常反应。连续观察14d，小鼠外观、行为、体质量增长等均和对照组无明显差异，未出现小鼠死亡情况，各组小鼠解剖经肉眼观察，给药组小鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、肠等脏器亦无明显改变，和对照组相比无明显差异。

2.2 大鼠长期毒性实验

2.2.1 手参肾宝胶囊对长毒大鼠行为、外观、每周体质量影响

通过90d的实验观察表明，手参肾宝胶囊各组剂量组对大鼠的、毛色、尿色、粪便、活动情况、外观、饮水和饮食量、每周体质量均无明显影响，和对照组比较无明显差异。

2.2.2 手参肾宝胶囊对长毒大鼠脏器比重的影响

实验结果见表1、2、3。结果表明：手参肾宝胶囊给药90d后高、中、低各剂量组脏器指标均未见明显改变，和空白对照组比较无显著性差异（P＞0.05）。

表1 给药45d大鼠脏器系数的变化（±s，n=10，g/100g）

表1 给药45d大鼠脏器系数的变化（±s，n=10，g/100g）

脏器(g) 给药45d对照组(n=10)高剂量(n=10)中剂量(n=10)低剂量(n=10)心 0.36±0.05 0.37±0.03 0.38±0.04 0.34±0.06肝 2.94±0.29 3.07±0.34 3.27±0.47 2.99±0.45脾 0.22±0.07 0.19±0.02 0.19±0.02 0.19±0.02肺 0.62±0.11 0.66±0.07 0.59±0.08 0.60±0.13肾(单体) 0.34±0.04 0.36±0.04 0.36±0.04 0.33±0.03肾上腺(单体)0.010±0.005 0.012±0.005 0.014±0.005 0.011±0.005大脑 0.79±0.17 0.86±0.12 0.81±0.15 0.80±0.13子宫 0.22±0.02 0.24±0.08 0.21±0.11 0.18±0.10卵巢(单体) 0.007±0.002 0.007±0.001 0.006±0.001 0.008±0.001睾丸(单体) 0.57±0.05 0.61±0.07 0.61±0.06 0.50±0.17附睾(单体)0.141±0.011 0.143±0.007 0.148±0.013 0.151±0.028

表2 给药90d大鼠脏器系数的变化（±s，n=10，g/100g）

表2 给药90d大鼠脏器系数的变化（±s，n=10，g/100g）

脏器(g) 给药90d对照组(n=10)高剂量(n=10)中剂量(n=10)低剂量(n=10)心 0.36±0.05 0.34±0.06 0.34±0.02 0.34±0.05肝 2.83±0.24 2.77±0.47 2.81±0.29 2.72±0.40脾 0.20±0.02 0.19±0.03 0.18±0.02 0.18±0.02肺 0.52±0.06 0.51±0.06 0.51±0.07 0.56±0.19肾(单体) 0.32±0.03 0.31±0.04 0.30±0.01 0.31±0.02肾上腺(单体)0.011±0.004 0.010±0.003 0.010±0.002 0.009±0.003大脑 0.73±0.17 0.71±0.10 0.70±0.13 0.68±0.15子宫 0.33±0.17 0.16±0.05 0.24±0.15 0.23±0.00卵巢(单体) 0.010±0.002 0.008±0.001 0.008±0.002 0.007±0.001睾丸(单体) 0.51±0.04 0.44±0.13 0.52±0.02 0.53±0.10附睾(单体)0.17±0.01 0.15±0.02 0.17±0.00 0.17±0.02

表3 停药15d大鼠脏器系数的变化（±s，n=10，g/100g）

表3 停药15d大鼠脏器系数的变化（±s，n=10，g/100g）

脏器(g) 停药15d对照组(n=10)高剂量(n=10)中剂量(n=10)低剂量(n=10)心 0.34±0.02 0.34±0.03 0.34±0.02 0.33±0.03肝 2.59±0.17 2.73±0.22 2.78±0.25 2.67±0.21脾 0.17±0.02 0.18±0.02 0.18±0.01 0.18±0.02肺 0.48±0.05 0.50±0.08 0.42±0.15 0.51±0.07肾(单体) 0.29±0.03 0.30±0.03 0.31±0.02 0.30±0.04肾上腺(单体)0.010±0.002 0.011±0.004 0.011±0.004 0.009±0.003大脑 0.69±0.10 0.70±0.14 0.72±0.11 0.70±0.11子宫 0.29±0.16 0.26±0.12 0.28±0.13 0.24±0.13卵巢(单体) 0.010±0.003 0.010±0.001 0.010±0.003 0.009±0.002睾丸(单体) 0.49±0.02 0.45±0.07 0.51±0.04 0.52±0.12附睾(单体)0.16±0.01 0.14±0.03 0.16±0.01 0.15±0.04

2.2.3 手参肾宝胶囊对长毒大鼠血液生化指标的影响

实验结果见表4、5、6、7。结果表明：手参肾宝胶囊给药45、90d、停药15d后高、中、低各剂量组血液生化、血象指标均未见明显改变，和空白对照组比较无显著性差异（P＞0.05）。

2.2.4 手参肾宝胶囊对长毒大鼠主要器官组织形态学的影响

藏药手参肾宝胶囊给药45d、90d和停药15d对空白对照组及手参肾宝胶囊高、中、低剂量组各抽取3～4只大鼠（雌雄各半），分别取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、大脑、生殖器官（雌性：子宫、卵巢，雄性：睾丸、附睾）等组织块用10%液体石蜡固定，经石蜡包埋、显微切片（厚4～6µm）、脱蜡水化、HE染色、梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固后，光学显微镜下进行组织学观察。主要观察如下：肺脏：各组大鼠绝大部分肺组织细支气管及其周围、肺泡内和肺泡间隔未见明显的炎症细胞浸润；少部分肺组织肺泡间隔增宽，毛细血管扩张充血，可能因抓取动物时所致；心、肝、脾、肾、肾上腺、大脑、生殖器与对照组比较无显著性差异，未见异常。

表4 给药45d、90d及停药15d大鼠的血液生化指标（±s）

表4 给药45d、90d及停药15d大鼠的血液生化指标（±s）

别 时间 ALT(U/L)组AST(U/L)T-BIL(μmol/L)TP(g/L)A/G对照组给药45d 51.80±7.51 178.40±29.90 0.63±0.24 58.04±3.36 0.72±0.08给药90d 57.22±7.03 191.11±12.50 0.93±0.47 53.58±2.25 0.84±0.07停药15d 53.60±8.14 190.30±15.05 1.07±0.41 56.03±1.88 0.82±0.12高剂量给药45d 65.00±39.99 210.10±57.85 0.76±0.42 59.52±3.73 0.69±0.12给药90d 52.00±4.08 161.70±48.76 0.78±0.27 55.09±2.90 0.74±0.17停药15d 52.50±6.33 193.50±6.52 0.93±0.57 57.89±2.10 0.77±0.09中剂量给药45d 49.78±6.46 186.22±21.59 0.80±0.62 54.68±2.73 0.71±0.12给药90d 58.20±13.75 184.80±29.55 0.86±0.33 53.31±2.74 0.84±0.13停药15d 61.80±17.41 188.00±21.33 1.27±1.01 57.15±3.89 0.82±0.15低剂量给药45d 60.80±14.02 185.50±25.04 0.79±0.68 60.35±5.26 0.68±0.08给药90d 54.60±5.58 183.24±12.24 0.65±0.25 53.04±7.99 0.91±0.44停药15d 57.10±19.98 203.50±29.33 1.55±1.70 55.51±2.45 0.89±0.21

表5 给药45d、90d及停药15d大鼠的血液生化指标（±s）

表5 给药45d、90d及停药15d大鼠的血液生化指标（±s）

组别 时间 ALB(g/L)BUN(mmol/L)GLU(mmol/L)Cr(mmol/L)UA(μmol/L)对照组给药45d 24.10±1.68 6.80±0.57 3.59±0.34 33.94±2.70 44.60±12.04给药90d 24.31±1.01 6.95±0.79 3.68±0.79 36.33±4.33 53.22±24.73停药15d 24.81±1.63 7.02±1.02 3.09±0.29 55.10±6.08 51.50±14.52高剂量给药45d 23.99±1.52 7.01±0.59 3.61±0.55 35.53±4.05 53.90±16.53给药90d 22.93±2.98 7.29±0.78 3.55±0.88 33.30±1.42 46.80±10.38停药15d 25.03±1.62 6.62±0.66 3.25±0.46 57.90±3.90 54.50±12.91中剂量给药45d 22.76±1.47 6.36±0.74 4.19±1.12 31.92±3.58 51.44±19.63给药90d 23.84±1.72 6.72±0.98 3.21±0.64 34.70±4.24 58.60±31.85停药15d 25.30±2.81 7.30±1.22 3.11±0.42 49.30±9.71 57.00±10.99低剂量给药45d 24.54±2.18 7.00±1.11 5.31±1.56 35.81±4.00 71.20±28.60给药90d 23.49±1.64 6.92±0.69 3.78±0.88 34.20±3.46 66.60±19.31停药15d 25.68±2.84 7.86±0.56 2.90±0.89 64.20±35.6 62.70±26.09

表6 给药45d、90d及停药15d大鼠的的血象变化（±s）

表6 给药45d、90d及停药15d大鼠的的血象变化（±s）

组别 时间 WBC(109/L)RBC(1012/L)NEUT(%)LYM(%)MXD(%)对照组给药45d 3.49±1.12 8.31±0.44 14.56±8.15 69.15±8.29 5.46±1.22给药90d 3.17±0.91 8.82±0.44 11.82±11.23 72.43±5.06 3.25±3.30停药15d 2.75±0.71 9.05±0.53 25.22±5.20 69.1±4.98 3.99±2.01高剂量给药45d 4.22±2.16 8.62±0.47 16.33±9.51 72.09±4.40 5.92±2.84给药90d 3.20±1.14 8.72±0.39 9.99±5.99 72.56±5.20 3.87±4.40停药15d 3.70±1.61 9.13±0.36 23.77±5.79 70.36±6.92 4.57±1.98中剂量给药45d 3.66±1.22 8.39±0.49 15.61±9.32 72.32±4.23 5.09±2.91给药90d 3.63±0.82 8.79±0.32 15.11±9.65 72.88±4.70 3.75±3.16停药15d 3.05±1.09 9.00±0.56 22.68±8.12 70.34±6.16 4.17±2.12给药45d 3.31±1.17 8.62±0.74 15.96±11.69 73.17±7.62 3.45±2.50给药90d 3.61±1.67 9.04±0.29 15.93±9.03 73.60±6.65 3.62±2.51停药15d 3.11±1.16 9.02±0.63 24.37±6.01 72.55±3.93 4.58±1.44低剂量

3 讨 论

本文观察了藏药手参肾宝胶囊最大耐受量为17.25g/kg，是临床剂量的1725倍，连续观察14d，小鼠外观、行为、体质量增长等均和对照组无明显差异，未出现小鼠死亡情况，各组小鼠解剖经肉眼观察，给药组小鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、肠等脏器亦无明显改变。

表7 给药45d、90d及停药15d大鼠的的血象变化（±s）

表7 给药45d、90d及停药15d大鼠的的血象变化（±s）

组别 时间 Hgb(g/L)HCT(%)MCHC(g/L)MCH(pg)Plt(109/L)对照组给药45d 154.20±7.50 46.79±1.91 329.40±4.06 18.57±0.28 992.90±97.89给药90d 159.30±7.38 46.68±1.96 341.10±4.43 18.06±0.39 908.90±77.76停药15d 162.40±6.06 49.79±1.19 326.10±5.80 17.96±0.54 958.50±51.15高剂量给药45d 159.70±7.79 48.85±2.94 327.10±7.02 18.54±0.23 929.20±51.87给药90d 158.20±4.85 46.32±1.20 341.60±4.79 18.13±0.37 911.90±53.92停药15d 163.50±4.43 50.36±0.93 324.60±4.17 17.91±0.32 961.90±30.95中剂量给药45d 155.78±8.80 46.91±2.15 331.89±4.26 18.57±0.34 929.89±78.90给药90d 159.50±4.30 46.23±1.26 342.61±2.87 18.16±0.44 925.20±65.02停药15d 162.00±6.73 49.38±1.73 328.10±2.73 18.03±0.49 926.20±41.44低剂量给药45d 160.40±13.08 47.64±3.67 331.00±4.81 18.65±0.23 854.00±293.51给药90d 164.10±6.31 47.35±1.66 340.56±4.62 18.13±0.35 968.20±77.65停药15d 161.90±9.27 49.50±2.31 327.10±4.25 17.97±0.40 896.30±85.98

长期毒性实验以藏药手参肾宝胶囊每天按1g/kg、0.5g/kg、和0.25g/kg连续灌胃90d，大鼠生长发育良好，无死亡，实验动物外观、行为活动、体质量增长、主要脏器系数、血象、血液生化等指标与空白对照组比较均无显著性差异。对心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、大脑生殖器官（雌性：子宫、卵巢，雄性：睾丸、附睾）主要脏器组织结构肉眼及光镜检查亦无异常发现。以上毒性实验研究结果提示该药毒性低，在用药周期内是安全的。

[1]中国医学科学院药物研究所.中药志[M].北京:人民卫生出版社出版,1982:276.

[2]吕国枫,尚德静,任延波.冬虫夏草制剂的补肾壮阳作用研究[J].中国运动医学杂志,2004,23(2):193-195.

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[4]《中药、天然药物长期毒性试验技术指导原则》课题研究组(SFDA文件).中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则,指导原则编号[Z].GPT2-1.2005:3.