双抗CMV和ToMV RNAi载体的构建及烟草遗传转化
2012-11-10田桂英乔亚红向本春郑银英李诗林崔百明
田桂英,乔亚红,向本春,郑银英,李诗林,崔百明
(石河子大学农业生物技术重点实验室/石河子大学农学院,石河子832003)
黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)属于雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)黄瓜花叶病毒属(Cucumovirus)。其寄主范围广泛,能侵染85科365属1000多种双子叶和单子叶植物[1]。目前已成为世界范围内危害蔬菜最严重的几种病毒之一,对番茄的危害十分严重。番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,To MV)属于烟草花叶病毒属病毒(Tobamoviruses),其寄主范围很广,能侵染茄科、十字花科、禾本科、藜科、豆科等许多植物,番茄是其主要寄主。近年来,新疆加工番茄病毒病逐年加重,主要是这2种病毒的复合侵染,引起严重的条斑坏死症状。病情严重时,可造成番茄茎上条斑开裂,致使其上部茎叶全部枯死,果实僵小畸形,表面生成褐色油浸状斑块,甚至龟裂,从而严重影响了加工番茄的品质和产量,造成较大的经济损失[2-3]。
RNAi是近年来迅速发展起来的一项基因阻隔技术[4-5]。随着RNAi的机制被逐步阐明,其特异性和有效性逐渐被人们所认识。其广泛应用于植物抗病毒的研究,已成功获得了抗一种或多种植物病毒的转基因植株[6-11]。目前,许多学者运用 CMV CP基因、TMV CP基因获得了抗病毒的转基因番茄植株,而对抗To MV转基因番茄植株研究报道很少。对于同一寄主存在着多种病毒复合侵染的情况,就需要采用抗多种病毒的技术策略。RNAi技术只需要部分靶基因序列,就可起到干扰作用,最小干扰片段只要几十个碱基序列。因此,可以通过序列的拼接技术,将多个病毒序列融合,构建成多抗载体。……