赵洪昌，王 莹，赵文静

（1.长春急救中心，吉林 长 春130062；2.吉林省肝胆病医院）

熊果酸（Ursolic acid，UA），又名乌索酸，乌苏酸，是存在多种天然植物中的五环三萜类化合物，如白花蛇香草、山楂、女子贞、夏枯草等，熊果酸具有保护肝脏、降血脂、调节机体免疫、抗氧化和抗肿瘤等多种生物学活性［1，2］，研究表明熊果酸可通过诱导细胞凋亡抑制多种肿瘤细胞的生长，如人乳腺癌、胃癌、肺癌、淋巴瘤等［3－6］。关于熊果酸对人白血病HL－60细胞的增殖抑制作用、诱导凋亡作用及相关机制尚未见报道，本研究以HL－60细胞为研究对象，观察熊果酸对HL－60细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡作用，并采用流式细胞术、Western blot技术研究熊果酸诱导HL－60细胞凋亡的分子机制，为熊果酸的开发利用提供实验基础和理论依据。

1 材料与方法

1.1 试剂及仪器

熊果酸为分析纯，纯度＞99.9%，购自天津市医药科学研究所；Annexin V－FITC／PI细胞凋亡检测试剂盒购自北京鼎国生物公司、Caspase－9／3蛋白活性检测试剂盒购自南京凯基生物公司；小鼠抗人Cyt－c、β－actin单克隆抗体美国 Santa Cruz公司，O－lympus荧光显微镜 （Olympus，Japan）；Beckman－XL流式细胞仪（Beckman，USA）。

1.2 方法

1.2.1 UA对HL－60细胞生长的抑制作用 参考文献［7］，MTT法测定熊果酸作用48 h对 HL－60细胞的增殖抑制作用（熊果酸的终浓度为5、10、20、30、40、50μmol／L）。抑制率（inhibition rate，IR）＝（对照组A值－实验组A值）／阴性对照组A值×100% ，并计算IC50值。

1.2.2 HL－60细胞丫啶橙（AO）荧光染色 参照文献［8］方法，不同浓度熊果酸作用48 h后收集HL－60细胞，A O染色，荧光显微镜下观察 HL－60细胞形态。

1.2.3 Annexin V－FITC／PI双染色法检测细胞凋亡 参照文献［9］方法，不同浓度熊果酸作用48 h后收集HL－60细胞，严格按照说明书进行操作，采用流式细胞仪测定HL－60细胞的凋亡情况率。……