刘宗霞，王 建，李 纾，杨春俞

(山东:1.潍坊医学院口腔医学系，潍坊 261053;2.潍坊口腔医院，潍坊 261011;3.山东大学口腔医学院牙周病科，山东省口腔生物医学重点实验室，济南 250012)

牙的萌出是牙胚、牙槽骨以及诸多细胞及其分子相互作用且复杂有序的生理过程。这一过程需要在牙胚的冠方形成萌出通道，即由邻近牙槽骨吸收形成硬组织通道，并且软组织通过吸收改建而形成软组织通道。表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)是参与牙萌出的关键性调控因子之一，Cohen(1962)首先发现将EGF注射到新生小鼠体内可以使切牙早熟性地萌出［1］，并且Hoath等［2］证实在大鼠出生后0～3 d注射EGF，其促萌效果最佳，但其是否参与软、硬组织通道的形成尚不清楚。

本研究通过观察EGF/EGFR(epidermal growth factor receptor，表皮生长因子受体)在牙齿萌出前后口腔黏膜中的表达差异，研究EGF是否参与牙齿萌出通道的形成;通过研究EGF与牙囊细胞中单核细胞趋化蛋白－1(monocyte chemotactic protein－one，MCP－1)的关系，探讨其在牙槽骨的吸收，即硬组织通道形成过程中的作用。

1 材料和方法

1.1 主要材料和试剂

出生后不同发育期SPF级BALB/c小鼠、SPF级4～6 d龄Wistar大鼠(山东大学动物中心提供);PV二步法免疫组化检测试剂盒和DAB试剂盒(迈新生物技术公司);α－MEM培养液(Hyclone，美国);胎牛血清(FBS)(杭州四季青);EGF(Sigma，美国);四唑盐(MTT)、Trizol(上海生工生物工程有限公司);逆转录试剂盒(Fermentas);PCR试剂盒(大连宝生物公司)。

1.2 EGF/EGFR在牙齿萌出过程中表达的组织学定位观察

1.2.1 标本处理

分别取出生后13、15 d以及牙齿已萌出完成的成年BALB/C小鼠各4只，引颈处死后，分离解剖含下颌第一磨牙的下颌骨，置新鲜配制40 g/L多聚甲醛中固定过夜，根据发育时期的不同，分别用100 g/L EDTA脱钙液常温脱钙1～3月不等。……