梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒多联实时定量PCR检测方法的建立及初步应用
2012-11-02徐军孙志华刘娟孟茹戴莉段晓东叶志辉
石河子大学学报(自然科学版) 2012年4期
关键词:检测
徐军,孙志华,刘娟,孟茹,戴莉,段晓东,叶志辉
(1新疆阿拉山口出入境检验检疫局,阿拉山口833418;2石河子大学动物科技学院,石河子832003;3青海省西宁市畜牧兽医总站,西宁810000)
梅迪-维斯纳病毒(Maedi-visna virus,MVV)是一种反转录病毒,主要侵染宿主的单核/巨噬细胞系的细胞。患病动物表现为严重消瘦、呼吸困难、跛行、由淋巴组织增生而致乳腺硬化、间质性进行性肺炎、关节炎等临床症状。梅迪-维斯纳病被认为最为典型的慢病毒病,世界动物卫生组织(OIE)将之列为B类疫病,我国将其列为二类动物疫病。该病的传播对养殖业造成了极大的危害[1-3]。
羊痘(Capripox virus,CPV)是由羊痘病毒引起的羊一种急性、热性、接触性传染病。其发病特征为发热、无毛或少毛部位皮肤黏膜发生丘疹和疱疹。羊痘是所有动物痘病中最为严重的一种,常引起羔羊的死亡,致死率可达100%,成年易感绵羊的死亡率为50%左右。因此被世界动物卫生组织(OIE)列为A类重大传染病[4-5],我国将其列为一类动物疫病。
实时荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)具有敏感、快速、准确的特点,且在核酸快速扩增的同时实现模板的定量测定。目前,多联SYBRGreen I实时荧光PCR技术可以在同一个PCR反应中,通过Tm值分析来区分不同的核酸片段[6-7],这为同时检测多种病原提供了技术支持。
本试验设计扩增梅迪-维斯纳病毒与羊痘病毒特异性基因的引物并组合建立可以同时检测梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒的多联荧光定量PCR体系,对此体系进行优化,旨在为梅迪-维斯纳病和羊痘的检测提供一种新手段。……
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