佛手饮料废渣中分离柠檬苦素的研究＊

柠檬苦素类化合物是一类高度氧化的四环三萜类植物次生代谢产物，有解痉挛与中枢抑制、保护心血管系统、抗过敏和抗炎等作用［3-8］.目前，传统的分离柠檬苦素的方法主要是以柑橘属植物为提取材料，使用大孔树脂吸附法.但传统分离方法用时长，分离效果受树脂吸附作用的影响大［9-10］.而Sephadex LH-20凝胶柱能够简单、快捷、高效率地分离柠檬苦素［11-12］.本实验首次以佛手饮料废渣作为柠檬苦素的提取材料，使用Sephadex LH-20凝胶柱色谱进行分离纯化，用核磁共振(NMR)方法进行结构鉴定，并结合高效液相色谱(HPLC)法对柠檬苦素进行了定量测定.

1 材料与方法

1.1 实验材料

佛手饮料残渣：浙江省金华市金佛手农业开发有限公司;柠檬苦素标准品：上海源叶生物科技有限公司;葡聚糖凝胶LH-20(Sephadex LH-20)：通用电气(GE)公司;乙腈(色谱纯);二氯甲烷(色谱纯).其他试剂均为市售分析纯.

色谱仪BioLogic DuFlow Pathfinder 80 System：Bio-Rad公司，美国;AV400傅立叶核磁共振波普仪：bruker公司，美国;DZF-6050B型真空干燥箱：上海一恒科技有限公司;RE-52B旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂;超声波清洗器：宁波新芝生物科技股份有限公司.

1.2 柠檬苦素分离纯化

取150 g佛手饮料废渣，料液比为1∶3，热水回流3 h后过滤，滤液依次用500 mL石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到各萃取部分及水溶液部分.取乙酸乙酯部分浓缩至浸膏，将浸膏真空干燥后得2 g柠檬苦素粗品，再用1.5 mL V(甲醇)∶V(二氯甲烷)=1∶1的混合溶剂溶解，得棕黄色样品溶液.柠檬苦素分离纯化流程见图1.

1.3 凝胶柱……

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