刘敏，任石涛，王晓闻

（山西农业大学 食品学院，山西 太谷030801）

酸浆［Physalis al kekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino］，别名红姑娘、泡泡草等，茄科，酸浆属，为多年生宿根草本植物［1］。酸浆始载于《神农本草经》，明朝李时珍《本草纲目》中也有记载［2］。酸浆全草含有许多功能性化学成分，包括甾体类，生物碱类，脂类，矿物质，色素类，氨基酸类，糖类及其他成分等［3］。酸浆叶中含有大量的黄酮类物质，所以它具有消炎，抗肿瘤，抗糖尿病，抗菌及抗病毒等方面的功能［4］。

酸浆在中国各地均有野生分布，适应性强。目前有关酸浆的研究也不够深入，尤其是对酸浆叶子的报道较少，而且以其为原料的食品及药品市场上还不多见。酸浆有待于进一步的开发利用，是一种非常有发展前景的经济作物。本实验将酸浆叶子做成绿茶是发挥酸浆叶功效的最简单、最方便、最快捷与最有效的方法，可以被人体更好的利用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 原料

本试验采用大同市阳高县长城镇提供的8月份酸浆植物的叶子，采用传统工艺。

1.1.2 主要试剂

试验中所用试剂均为分析纯。

无水甲醇、氯化铁、氯化钾、二苯代苦味酰肼自由基（DPPH·）：美国Sig ma公司。

丁基羟基甲苯（BHT）、水杨酸、邻苯三酚、硫酸亚铁（FeSO4·7 H2O）、硫代巴比妥酸、铁氰化钾（K3Fe（CN）6）、Tris：北京瑞尔欣德科技有限公司；三氯甲烷、三氯乙酸、冰乙酸、30%双氧水（H2O2）、淀粉。

1.1.3 仪器与设备

BS224S电子天平、台式低速离心机（L－550）（北京赛多利斯仪器系统有限公司）、756型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）、JDG－0.2真空冻干试验机、电热恒温水浴锅（北京化玻联医疗器械有限公司）、电热恒温鼓风干燥箱（上海新苗医疗器械制造有限公司）

1.2 方法

1.2.1 酸浆绿茶还原能力的测定

参照魏金涛等人的方法进行测定［6］。

1.2.2 酸浆绿茶对DPPH·自由基清除能力的测定

DPPH·自由基清除能力的方法参考Yamaguchi等［7］报道的方法与于继宾［8］的方法进行测定。

1.2.3 酸浆绿茶对·OH自由基清除能力的测定

·OH自由基清除能力的方法主要参照陈伟等［9］报道的方法测定。

1.2.4 酸浆绿茶对O2－·自由基清除能力的测定

酸浆绿茶对O2－·自由基清除能力的测定方法参照徐怀德［10］报道的方法。

1.2.5 酸浆绿茶对脂质过氧化物清除能力的测定

用甲醇将酸浆绿茶粉溶解，配成2 g·L－1溶液，并作一系列的稀释。将0.5 mL鸡蛋黄匀浆液与10%、0.2 mol·L－1的PBS溶液（p H＝7.4）混合后加入不同浓度的样液0.5 mL混合，再加入0.07 mol·L－1的FeSO4溶液0.05 mL，摇匀，放在37℃下保温30 min后加入20%的三氯乙酸1.5 mL和等体积0.8%的硫代巴比妥酸，反应终止，最终的混合物在100℃的温度下加热5 min后在3000 r·min－1的转速下离心10 min，取其上清液，于532 n m处检测上清夜的吸光度。以不加硫代巴比妥酸的溶液为空白溶液。以BHT作为标准对照，按下式计算各待测样品对脂质过氧化物的清除能力。重复3次取平均值。

式中：A——样液与反应溶液混合液的吸光值；

A1——样液与空白溶液混合液的吸光值；

A0——不加样液的吸光值。

2 结果与分析

2.1 酸浆绿茶总还原能力的测定

由图1可看出，酸浆绿茶样品在低浓度下，A700值较小，随着浓度的增加，A700值也随之增大。说明酸浆绿茶在一定浓度下具有还原能力。

图1 酸浆绿茶的还原能力Fig.1 The reducing power of Physalins green tea

2.2 酸浆绿茶对DPPH·自由基清除能力

由图2、图3可看出，酸浆绿茶对DPPH·自由基有一定的清除能力，清除能力随浓度的增加而增大。溶液浓度达到1 g·L－1时 ，对DPPH·自由基清除率可以达到90.8%。通过回归方程y＝－28.097x2＋117.96 x＋1.2571，R2＝0.9995及y＝－92146x2＋3414.7 x＋11.623，R2＝0.978得出酸浆绿茶、Vc对DPPH·自由基的半抑制浓度IC50值为0.45 g·L－1、0.060 g·L－1。结果表明，一定浓度的酸浆绿茶对DPPH·自由基具有较强的清除能力，但没有Vc的能力强。

图2 酸浆绿茶清除DPPH·自由基的能力Fig.2 Scavenging activity of physalins green tea on DPPH·radical

2.3 酸浆绿茶对·OH自由基的清除能力

由图4可看出，随着浓度的增加，酸浆绿茶对Fenton反应体系产生的羟自由基的清除力逐渐上升，当浓度为2 g·L－1时，清除作用最强，其清除率达到63.8%。实验数据用Excel进行多项式回归，回 归 方 程 为 y＝ －5.945x2＋31.157 x＋2 4.9 1 2，R2＝0.9 7 6 5，及y＝－1 5.5 9 1 x2＋71.003 x＋18.941，R2＝0.9963，回归方程显著。通过回归方程得出酸浆绿茶、Vc清除羟自由基的半抑制浓度IC50值0.99 g·L－1、0.22 g·L－1。结果表明，一定浓度酸浆绿茶也有清除羟自由基的能力，但是作用不强。

图3 Vc清除DPPH·自由基的能力Fig.3 Scavenging activity of Vc on DPPH·radical

图4 酸浆绿茶及Vc清除·OH自由基的能力Fig.4 Scavenging activitv of physalins green tea and Vc on hydroxyl radical

2.4 酸浆绿茶对O2－·的清除能力

由图5可看出，反应体系吸光值随反应时间延长而稳定增加，在体系反应时间内，吸光值和反应时间线性关系良好，相关系数达0.9998，说明反应体系在前3 min的反应时间内，稳定积累有色中间产物，邻苯三酚自氧化速率稳定，根据线性方程y＝0.0342x＋0.1146可知，邻苯三酚自氧化速率V0为0.0342。

由图6可看出，当样品浓度为2 g·L－1时，其清除率为4.3%，说明酸浆绿茶对O2－·自由基的清除效果不佳。y＝0.1714x2－0.4626x＋2.192，R2＝0.9448，回归方程显著。由方程计算得出酸浆绿茶对清除超氧阴离子自由基的IC50值分别为15.43 g·L－1。试验结果表明，一定浓度的酸浆绿茶的可清除超氧阴离子自由基，但是作用较弱。

图5 邻苯三酚自氧化速率的测定Fig.5 Linearity correlation bet ween reaction time and adsorbancy of reaction system

图6 酸浆绿茶清除超氧阴离子自由基的能力Fig.6 Scavenging activitv of physalins green tea on superoxide anion radical at different concentrations

2.5 酸浆绿茶对脂质过氧化物的抑制作用

由图7可看出，随着浓度的增加，酸浆绿茶对脂质过氧化物的清除力逐渐上升，当浓度为2 g·L－1时，清除作用最强，其清除率达到67.9%。实验数据用Excel进行多项式回归，回归方程显著。通过回归方程得出酸浆绿茶清除脂质过氧化物的半抑制浓度IC50值，为0.83 g·L－1。结果表明，一定浓度的酸浆绿茶对脂质过氧化物有较强的清除作用。

3 结论与讨论

还原力是表示抗氧化物质能够提供电子能力强弱的重要指标，随着溶液的吸光度增大，还原能力增强，其抗氧化性亦增强［11～13］。二苯代苦味酰肼自由基（DPPH·）是一种较稳定的以氮为中心的自由基，如果受试物能够清除它，便可以评价此受试物的抗氧化能力［14～17］。O2－ ·和·OH 等活性氧自由基诱导的氧化损伤一直被认为是引起衰老、细胞损伤、死亡和组织伤害、细胞癌变的原因之一［18］。·OH是最强活性自由基，也是毒性最大的自由基。它可与活细胞中任何分子发生反应造成损害，并导致遗传突变、膜损伤、酶失活、线粒体氧化磷酸化作用等一系列变化［19］。超氧阴离子在人体内存在的一定数量，不发生化学变化对人体无害，但是一旦与羟基结合生成的产物就会对细胞DNA造成损害，从而破坏了人类机体功能。脂质过氧化过程中发生的ROS氧化生物膜的过程，期间可能生成脂质过氧化产物如丙二醛（Malonaldehyde，MDA）和4－羟基壬烯酸（4－hydroxynonenal，HNE），从而改变细胞膜的流动性和通透，最终使细胞结构和功能得到改变。

试验结果表明酸浆绿茶具有一定的还原力；对DPPH·自由基、·OH自由基、O2－·自由基具有一定的清除能力，对脂质过氧化物有抑制作用，其IC50值分别为0.45 g·L－1、0.99 g·L－1、15.43 g·L－1、0.83 g·L－1；对DPPH·自由基的清除能力较强，但对O2－·自由基的清除能力较弱。酸浆绿茶之所以有以上抗氧化作用可能由于所含的黄酮有关［20］，酸浆绿茶的提取物有待于进一步的研究。

图7 酸浆绿茶对脂质过氧化物清除能力Fig.7 Scavenging Activity of physalins green tea on the POV

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