杜双奎，赵晓野，李志西*

(西北农林科技大学食品科学与工程学院，陕西 杨凌 712100)

枳椇醋解酒护肝、减肥降脂作用研究

杜双奎，赵晓野，李志西*

(西北农林科技大学食品科学与工程学院，陕西 杨凌 712100)

为研究枳椇果柄酿制的枳椇果醋解酒护肝、减肥降脂的功能特性。以20只小鼠随机分成2组，模型组和枳椇醋组。模型组、枳椇醋组每天先分别灌胃0.1mL的生理盐水、0.1mL枳椇醋，30min后再各灌胃0.15mL的52%配制酒，30d连续酒精灌胃后取小鼠肝脏制成10%的匀浆，测定小鼠肝脏中的还原型谷胱甘肽(GSH)含量、丙二醛(MDA)含量和乙醇脱氢酶(ADH)活力，并对肝脏病变情况观察；另以50只小鼠随机分为5组，即正常组、肥胖模型组、枳椇醋减肥实验组、高血脂模型组、枳椇醋降血脂实验组，每组10只。小鼠喂养30d后，测定体质量、脂肪含量、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。结果表明：枳椇醋能够提高小鼠肝脏中GSH含量和ADH活力，降低MDA含量，可显著缓解连续灌酒引起的肝脏脂肪变性和肝细胞肿大等症状，具有解酒护肝作用。枳椇醋对小鼠的体质量增长和脂肪组织的生成有一定的抑制作用，具有减肥功效；食用枳椇醋可预防动脉硬化，降低血清中的血脂含量，具有降血脂作用。

枳椇醋；急性酒精中毒；护肝；减肥；降血脂

枳椇(Hovenia dulcisThunb.)为鼠李科(Rhamnaceae)拐枣属(HoveniaThunb.)植物，又名拐枣、万寿果、金钩子。在我国除东北以外各省区均有分布，目前多以野生、半野生为主，其中尤以陕、川、渝量多质佳[1-3]。枳椇叶含有丰富的皂苷、黄酮、生物碱等活性成分，在抑制应激性胃溃疡、利尿、降压、防癌[4]等方面有一定作用；枳椇子在解酒[5-7]、保肝[7-9]、降压[10-11]、抗致突变、抗肿瘤[12-13]、抗脂质过氧化[14]等方面具有重要药理作用；枳椇果柄含有丰富的糖类、氨基酸、维生素等营养物质[3-4]，但由于其个体小、残渣多、适口性差，长期以来仅小部分被食用，尚未被开发其应用价值。果醋是一种新兴保健醋。枳椇醋是以新鲜枳椇果肉为原料酿造而成的一种口感醇厚、具有独特的香味新型果醋，在预防小鼠急性酒精中毒方面有显著效果[15]。本研究在前期研究基础上，以枳椇醋为实验材料，以ICR小鼠为载体，探讨枳椇醋的解酒护肝功能、减肥功能和降血脂功能，以期为枳椇果柄的利用提供指导。

1 材料与方法

1.1 实验动物

ICR小鼠，(20±2)g，购于第四军医大学动物中心，实验动物许可证号：SCXK(军)2009-007。

1.2 材料与试剂

枳椇醋：剥离枳椇子的枳椇果柄，采用液态深层发酵法酿制枳椇醋，酸度为3.0g/100mL(以乙酸计)。

小鼠灌胃用酒：酒度52%，用无水乙醇与纯净水按体积比52:48调配而成；小鼠基础饲料：第四军医大学实验动物中心提供，符合GB14924.3—2001《实验动物小鼠大鼠配合饲料》；高脂肪营养饲料：每100g 基础饲料中添加奶粉10g、猪油10g、鸡蛋1枚、浓鱼肝油10滴，混和均匀，制成高脂肪营养饲料；高血脂营养饲料：将蛋黄粉10g、猪油5g、胆盐0.5g与基础饲料85g混合均匀，制成高血脂营养饲料。

乙醇脱氢酶(ADH)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、还原型谷胱甘肽(GSH) 试剂盒、总胆固醇(TC)试剂盒、甘油三酯(TG)试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒 南京建成生物工程有限公司。

1.3 仪器与设备

ILab600STD全自动生化分析仪、UV-2550双光束紫外分光光度计 日本岛津公司；舒美KQ218超声波仪 江苏省昆山市超声仪器有限公司；TD5A台式离心机 湖南凯达科学仪器有限公司；Leisa石蜡切片机 德国徕卡公司；Motic BA400光学显微镜 德国麦克奥迪公司。

1.4 方法

1.4.1 枳椇醋对连续灌酒小鼠肝功能影响的实验设计

20只ICR小鼠随机分成2组，即模型组、枳椇醋组，每组10只。模型组、枳椇醋组每天先分别灌胃0.1mL的生理盐水、0.1mL枳椇醋，30min后再各灌胃0.15mL的52%配制酒，连续灌胃30d，处死前禁食12h。

1.4.2 枳椇醋对小鼠减肥降脂影响的实验设计

50只ICR小鼠，适应性喂养1周，随机分为5组，即正常组、肥胖模型组、枳椇醋减肥实验组、高血脂模型组、枳椇醋降血脂实验组，每组10只。正常组饲喂基础饲料、肥胖模型组和枳椇醋减肥实验组均饲喂高脂肪营养饲料，高血脂模型组和枳椇醋降血脂实验组均饲喂高血脂营养饲料，连续自由采食30d。同时对正常组和模型对照组灌胃给予0.2mL/(只·d)蒸馏水，其余各组分别用灌胃给予0.2mL/(只·d) 枳椇醋(酸度3.0g/100mL)，每天1次，连续灌胃30d。

1.4.3 生化指标测定及病理观察

1.4.3.1 肝功能指标分析

连续灌酒实验组小鼠处死后取肝脏分成两半，一半制成10%的匀浆，离心取上清液，按照南京建成生物工程研究所说明书中推荐的规范方法操作测定小鼠肝脏中ADH、MDA、GSH的含量；肝脏另一半立即浸泡在新配制的10%福尔马林固定液中固定24h，将固定好的组织进行流水冲洗、梯度酒精脱水、石蜡包埋、HE染色，采用Motic BA400光学显微镜及Motic Advance 3.0成像系统进行肝脏组织病理变化观察。

1.4.3.2 减肥降脂指标分析

小鼠喂养30d后，测定体质量，禁食12h，摘眼球取血，血液在37℃水浴30min后，3000r/min离心15min，取上清液得血清，按试剂盒规范操作测定TC、TG、HDL-C含量，计算动脉硬化指数。

式中：C1为TC含量；C2为HDL-C含量。

将取血后的小鼠处死，摘取生殖器周围的脂肪，称质量，计算脂肪系数。

式中：m0为脂肪质量；m1为小鼠体质量。

1.5 统计方法

利用SPSS软件对试验数据作t检验以比较模型组与对照组、处理组与模型组之间的差异性。

2 结果与分析

2.1 枳椇醋对小鼠肝组织中ADH活力的影响

ADH活力变化会影响到血中乙醇含量，该酶活性降低可使乙醇的体内代谢降低，进而加重乙醇对脑、肝脏等器官的毒害作用。由表1可见，连续灌胃52%配制酒30d后，与模型组相比，枳椇醋组小鼠肝脏中ADH活力明显升高(P＜0.01)，表明枳椇醋能明显加快乙醇分解为乙醛的速度，有利于肝脏中酒精的分解代谢，具有解酒作用，降低酒精对肝细胞的损害作用。

表1 小鼠肝脏中ADH活力、MDA含量以及GSH含量(±s, n=10)Table 1 ADH activity and the contents of MDA and GSH in the liver of mice (±s, n=10)

表1 小鼠肝脏中ADH活力、MDA含量以及GSH含量(±s, n=10)Table 1 ADH activity and the contents of MDA and GSH in the liver of mice (±s, n=10)

注：a. 与模型组比较，有显著性差异(P＜0.05)；b. 与模型组比较，有极显著性差异(P＜0.01) 。

组别 ADH活力/ MDA含量/ GSH含量/(U/mg pro) (nmol/mg pro) (g/L)模型组 19.33±2.93 30.14±2.52 11.06±1.51枳椇醋组 85.71±2.40b 27.06±0.60a 25.40±1.40b

2.2 枳椇醋对小鼠肝组织中MDA和GSH含量的影响

由表1可见，枳椇醋组小鼠肝脏中的MDA含量显著低于模型组(P＜0.05)，枳椇醋组小鼠肝脏中GSH含量极显著高于模型组(P＜0.01)。表明枳椇醋能显著降低酒精性肝损伤小鼠肝组织中MDA含量，提高肝组织中GSH含量，对酒精性肝损伤具有较好的保护作用。

2.3 枳椇醋对小鼠肝脏形态学影响

图1 小鼠肝脏组织切片(×400)Fig.1 HE staining of mouse liver tissues (×400)

图1为连续30d灌胃52%配制酒的小鼠肝脏组织图片。枳椇醋组的小鼠肝脏与正常组小鼠肝脏细胞大小均一，可见清楚的肝细胞索和肝窦隙结构，而模型组小鼠肝索紊乱，肝细胞肿大，胞浆浑浊，胞浆可见大小不等的脂肪滴，肝窦隙狭窄，甚至消失。表明枳椇醋对长期饮用酒精而造成的肝脏中脂肪肝的形成有抑制作用。

2.4 枳椇醋对减肥模型组小鼠体质量、生殖器周围脂肪总质量、脂肪系数的影响

3组小鼠体质量开始没有显著差异(P＞0.05)，随着饲喂时间的延长体质量有明显增加(表2)；从第6天开始，肥胖模型组小鼠体质量增长速度高于正常组小鼠，营养饲料增肥作用显著(P＜0.01)，肥胖模型建立成功；枳椇醋减肥实验组小鼠体质量增长速度低于肥胖模型组。

肥胖模型组小鼠生殖器周围脂肪总质量、脂肪系数显著高于正常组(P＜0.01)。枳椇醋减肥实验组小鼠生殖器周围脂肪总质量和脂肪系数显著小于肥胖模型组(P＜0.05)，表明枳椇醋具有抑制过剩脂肪的增长作用。

2.5 枳椇醋对降脂模型小鼠血清TC、TG、HDL-C含量和动脉硬化指数的影响

表2 枳椇醋对小鼠体质量、生殖器周围脂肪总质量、脂肪系数的影响(±s,n=10)Table 2 Effect of Hovenia dulcis Thunb. fruit vinegar on body weight, the weight of total fat tissues around the gonads , fat coefficient of mice (±s,n=10)

表2 枳椇醋对小鼠体质量、生殖器周围脂肪总质量、脂肪系数的影响(±s,n=10)Table 2 Effect of Hovenia dulcis Thunb. fruit vinegar on body weight, the weight of total fat tissues around the gonads , fat coefficient of mice (±s,n=10)

注：a.与正常组比较，有显著性差异(P＜0.05)；b.与正常组比较，有极显著性差异(P＜0.01)；c.与肥胖模型组比较，有显著性差异(P＜0.05)；d.与模型组比较，有极显著性差异(P＜0.01)。

生殖器周围脂肪总 脂肪系0d 6d 12d 18d 24d 30d 质量/g 数/%正常组 22.36±2.50 25.86±2.51 30.93±2.58 34.77±2.54 36.41±2.77 38.40±2.81 0.89±0.22 2.43±0.41肥胖模型组 22.99±2.41 31.05±2.67b 36.73±2.75b 41.07±2.49b 42.13±2.44b 44.23±3.36b 1.78±0.29b 4.13±0.46b枳椇醋减肥实验组 23.11±2.01 31.04±3.32 36.27±3.25 39.72±3.55 41.04±4.15 42.96±3.85 1.39±0.24c 3.49±0.45c组别 体质量

表3 枳椇醋对降脂模型小鼠血清TC、TG、HDL-C含量和动脉硬 化 指 数 的 影 响 (±s, n=10)Table 3 Effect of Hovenia dulcis Thunb. fruit vinegar on serum lipid indices and arteriosclerosis index of mice (±s, n=10)

表3 枳椇醋对降脂模型小鼠血清TC、TG、HDL-C含量和动脉硬 化 指 数 的 影 响 (±s, n=10)Table 3 Effect of Hovenia dulcis Thunb. fruit vinegar on serum lipid indices and arteriosclerosis index of mice (±s, n=10)

注：a.与正常组比较，有显著性差异(P＜0.05)；b.与正常组比较，有极显著性差异(P＜0.01)；c.与高脂模型组比较，有显著性差异(P＜0.05)；d.与高脂模型组比较，有极显著性差异(P＜0.01)。

组别 TC含量/ TG含量/ HDL-C含量/ 动脉硬化(mmol/L) (mmol/L) (mmol/L) 指数/%正常组 3.42±0.25 0.87±0.22 1.56±0.16 1.21±0.28高血脂模 5.32±0.23b 1.06±0.23a 2.28±0.16b1.33±0.30a型组枳椇醋降血 4.93±0.30c 1.01±0.10 2.67±0.37 0.89±0.32d脂实验组

由表3可见，高血脂模型组小鼠血清TC、TG、HDL-C含量以及动脉硬化指数显著高于正常组(P＜0.01，P＜0.05)，建模成功。枳椇醋降血脂实验组小鼠血清中TC含量显著低于高血脂模型组(P＜0.05)，枳椇醋对长期进食高血脂饲料小鼠血清中TC的增加具有明显的抑制作用。枳椇醋降血脂实验组小鼠血清中TG含量、HDL-C含量与高血脂模型组没有显著差异(P＞0.05)。枳椇醋降血脂实验组小鼠动脉硬化指数显著低于高血脂模型组(P＜0.01)，表明枳椇醋具有显著的降血脂作用。

3 结 论

枳椇醋能明显提高小鼠肝脏中ADH的活力，加快乙醇分解为乙醛的速度，阻止小鼠肝脏内MDA含量的升高，抑制肝脏内的氧化反应，降低GSH的消耗，起到解酒护肝作用。连续灌酒30d的小鼠肝脏的HE染色病理切片观察表明枳椇醋能显著缓解连续灌酒引起的肝脏脂肪变性和肝细胞肿大等症状，可有效缓解酒精对小鼠肝脏的损伤作用。

枳椇醋具有抑制小鼠体质量增长、过剩脂肪堆积作用，可明显抑制小鼠血清中TC、TG、HDL-C含量及动脉硬化指数的增长，控制血脂升高，具有减肥降血脂作用。

[1] 于斌如, 汤银红. 枳椇子的研究进展[J]. 时珍国医国药, 2004, 15(9):600-610.

[2] 申向荣, 张德志. 枳椇属植物的研究进展[J]. 时珍国医国药, 2007,18(6): 1351-1355.

[3] 江庆中, 符树根. 枳椇综合利用研究[J]. 江西林业科技, 2004(6): 3-6.

[4] 符树根, 江庆中. 枳椇果特性与饮料开发研究[J]. 中国林副特产, 2007(6): 21-23.

[5] 谢立, 陈振德, 孙新华, 等. 枳椇子解酒活性提取部位的研究[J]. 中国药房, 2007, 18(33): 2570-2572.

[6] 任发政, 罗云波, 蒋菁莉. 枳椇子影响乙醇代谢机理研究[J]. 食品科学, 2002, 23(12): 58-60.

[7] 嵇扬, 陆红, 杨平. 枳椇酒与枳椇子水提取液解酒毒作用比较研究.时珍国医国药, 2001, 12(6): 19-20.

[8] 丁静. 枳椇子预防大鼠酒精性脂肪肝的实验研究[J]. 浙江中西医结合杂志, 2007, 17(3): 156-158.

[9] HASE K, OHSUGI M, XIONG Q, et al . Hepatoprotective effect ofHovenia dulcisThunb. on experimental liver injuries induced by carbon tetrachloride orD-galactosamine/ lipopolysaccharide[J]. Biological &Pharmaceutical Bulletin, 1997, 20(4): 381-385.

[10] 嵇扬, 陈善, 张癸荣, 等. 枳椇水提取液对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖和肝糖原含量的影响[J]. 中药材, 2002, 25(3):190-191.

[11] 嵇扬, 姜春来, 张癸荣. 枳椇子对血压影响的实验研究[J]. 中医药学刊, 2003, 21(8): 1258-1259.

[12] SUTTISRI R, LEE I S, KINGHORN A D. Plant-derived triterpenoid sweetness inhibitors[J]. Journal of Ethnopharmacology, 1995, 47(4): 9-26.

[13] 嵇扬, 王文俊, 孙芳. 枳椇子水提液对小鼠综合体能的影响[J]. 中医药学报, 2003, 31(3): 22-23.

[14] 王艳林, 韩玉, 钱金萍. 枳椇子抗脂质过氧化作用的实验研究[J]. 中草药, 1994, 25(6): 306-307.

[15] 赵晓野, 李志西, 李红蕊, 等. 枳椇醋对小鼠急性酒精中毒预防作用的研究[J]. 中国酿造, 2009(1):74-76.

Hepatoprotective, Weight-Reducing and Hypolipidemic Effects ofHovenia dulcisThunb. Fruit Vinegar

DU Shuang-kui，ZHAO Xiao-ye，LI Zhi-xi*
(College of Food Science and Engineering, Northwest A & F University, Yangling 712100, China)

In order to explore the anti-alcoholic, hepatoprotective, weight-reducing and hypolipidemic effects ofHovenia dulcisThunb. fruit vinegar, 20 mice were divided randomly into 2 groups: model and treatment groups, which were given 0.15 mL of 52% aqueous alcohol solution 30 min after daily intragastric administration of normal saline and the fruit vinegar at the dose of 0.1 mL, respectively. After 30 days of administration, the mice were killed and their livers were collected and prepared into 10%homogenate for the determination of the contents of GSH and MDA and ADH activity and pathological observation. In addition,another 50 mice were divided randomly into 5 groups of 10 mice each: normal control group, obesity model control group,weight-reducing group treated withHovenia dulcisThunb. fruit vinegar, and hyperlipemia model control group and blood lipidreducing group treated withHovenia dulcisThunb. fruit vinegar. The body weight, fat coefficient and serum total cholesterol (TC),triglyceride (TG) and high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) of the mice were determined after 30 days of administration.Hovenia dulcisThunb. fruit vinegar could increase GSH content, improve ADH activity and decrease MDA content in the liver of mice. Meanwhile,Hovenia dulcisThunb. fruit vinegar could markedly reduce the denaturation of mouse blood lipid, and attenuate the hepatomegaly caused by chronic alcoholism. Moreover,Hovenia dulcisThunb. fruit vinegar could inhibit the increase of body weight and fat content to realize the weight-reducing function. Furthermore, the fruit vinegar could also prevent arteriosclerosis through reducing blood lipid.

Hovenia dulcisThunb. fruit vinegar；chronic alcoholism；hepatoprotective effect；weight-reducing effect；blood lipid-reducing effect

R151

A

1002-6630(2012)01-0235-04

2011-02-25

杜双奎(1972—)，男，副教授，博士，研究方向为食品加工与发酵。E-mail：dushuangkui@126.com

*通信作者：李志西(1958—)，男，教授，博士，研究方向为谷物功能食品及发酵技术创新。E-mail：lzx580721@yahoo.com.cn