王灏然，钟晓红，陆 英，张 双，张 喻，何艳君，周 敏

（湖南农业大学园艺园林学院，湖南长沙410128）

柿霜是柿饼生产后期与储藏过程中在其表面出现的白色颗粒状物。据《随息居饮食谱》记载：柿霜，乃柿之精华，甘凉清肺，治吐血、咯血、劳嗽、咽喉口舌诸病甚良”。《医学衷中参西录》也记载有：“柿霜入肺，而甘凉滑润。其甘也，能益肺气；其凉也，能清肺热；其滑也，能利肺痰；其润也，能滋肺燥”。由于柿霜具有较高的保健作用，现今柿霜除了用作中药外，还开发有柿霜糖等产品。在大众越来越注重养生与健康的今天，对柿霜的深入研究有着重要的意义。

柿霜是柿饼中可溶性糖随水渗出果面，待水分蒸发散失后，凝结成的白色结晶固体。柿饼出霜时分两个步骤：（1）柿饼内可溶性糖随水分外渗至表面；（2）表面水分蒸发散失后，残留下的糖凝结成固体。糖类是柿霜中的重要成分之一,因此本文旨在对柿霜中糖类组分进行测定分析，以期为柿霜的开发及其综合利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂和仪器

中药柿霜样品：中药店采购，产地为山东省菏泽市曹州和湖北省黄冈市团风。氯仿、盐酸羟胺、吡啶、乙酸酐、三氟乙酸、正丁醇等试剂均为分析纯；单糖标准品：葡萄糖（D-Glucose）、核糖（D-Ribose）、阿拉伯糖（L-Arabinose）、半乳糖（D-Galactose）、甘露糖（D-Mannose）、鼠李糖（L-Rhamnose）、岩藻糖（D-Fucose）均为生化试剂，力博生化试剂公司。GC2010气相色谱仪，日本岛津。

1.2 中药柿霜样品的前处理

分别称取曹州样品和团风样品1 g，充分溶解，定容至100 mL。将配好的样品分别加入25 mL Sevag试剂（氯仿∶正丁醇=4∶1），剧烈振荡 30 min 后静置30 min，离心除去沉淀（杂质和蛋白）之后，真空干燥，即得曹州柿霜和团风柿霜的多糖样品。

1.3 单糖标准品衍生物的制备

分别准确称取7种标准单糖——葡萄糖、核糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖和岩藻糖各10 mg，置于10 mL具塞刻度试管中，加入10 mg盐酸羟胺，1.0 mL吡啶，于90℃水浴振荡反应15 min，冷却至室温。再加入1.0 mL乙酸酐，90℃水浴继续反应30 min，生成糖腈乙酸酯衍生物。冷却后，分别加入1 mL氯仿萃取3次，取氯仿层进行分析。

1.4 气相色谱条件

Rtx-1701毛细管色谱柱，内径0.25 mm，柱长30 m，液膜厚度0.25 μm。进样口温度240℃；载气为高纯氮气，流速30 mL/min；氢气流速40 mL/min，空气流速 400 mL/min。进样量 1 μL，分流比为1/20，总流量17.1 mL/min，柱流量0.67 mL/min。氢火焰离子化检测器温度260℃。柱温采用程序升温，先升温至180℃，然后以 2℃/min的速度升至220℃，保持 10 min。

1.5 混合标样的制备

分别从已配置好的7种单糖糖腈乙酸酯标准品衍生物中取0.3 mL，加入同一支具塞试管中，即可得混合标样，直接进行气相色谱分析。

1.6 样品的水解和衍生

分别称取纯化后的柿霜多糖曹州样品和团风样品各50 mg于具塞试管中，各加入2 mol/L三氟乙酸4 mL，充氮气封管后于120℃水解5 h。取出样品溶液于65℃水浴中用氮气吹干。之后再分别加入50 mg盐酸羟胺和3.0 mL吡啶，在90℃水浴条件下振荡反应15 min，冷却至室温后分别加入3.0 mL乙酸酐，90℃水浴继续反应30 min，反应产物冷却后各加入3 mL氯仿萃取3次，进行气相色谱分析。

1.7 单糖标准品衍生物的标准曲线

气相色谱分析标准品单糖糖腈乙酸酯衍生物，进样量为 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 μL，与其对应的峰面积作成标准曲线。

2 结果与分析

2.1 混合标样的气相色谱分析

由混合标准单糖糖腈乙酸酯衍生物的气相色谱图可见（图1），7种单糖均得以良好分离，分析过程中均不产生异构峰。其中保留时间分别是：鼠李糖11.786 min、核糖12.455 min、阿拉伯糖13.089 min、岩藻糖 13.453 min、甘露糖 21.128 min、葡萄糖22.514 min、半乳糖 23.631 min。

图1 混合标准单糖糖腈乙酸酯衍生物的气相色谱图

2.2 中药柿霜样品的气相色谱分析

2.2.1 曹州样品的气相色谱分析 由图2可知，在与标准品相同的色谱条件下，保留时间可作为定性分析的依据，通过与图1中标准品单糖糖腈乙酸酯衍生物的保留时间相比较，即可检测到柿霜曹州样品含有鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、葡萄糖这4种单糖（图2）；未检测到岩藻糖、半乳糖及甘露糖。

图2 曹州样品糖腈乙酸酯衍生物的气相色谱图

2.2.2 团风样品的气相色谱分析 由图3可知，通过与图1中单糖标准品的保留时间相比较，检测到柿霜团风样品含有核糖、岩藻糖、葡萄糖这3种单糖；未检测到鼠李糖、半乳糖、甘露糖以及阿拉伯糖。

图3 团风样品糖腈乙酸酯衍生物的气相色谱图

其中两种中药柿霜样品均含有葡萄糖和核糖，而未检测出甘露糖和半乳糖。

2.3 标准单糖糖腈乙酸酯衍生物的线性回归方程

将已检测到的中药柿霜中所含有种类的单糖糖腈乙酸酯衍生后，按1.7的方法处理，根据不同的进样量即可得知对应的峰面积。由10 mg的单糖标准品，配成了1 mL的待测品，根据进样量的不同，可以对应得到该进样量中所含的单糖糖腈乙酸酯衍生物量（单位：mg）。因此，根据峰面积（y）和所含的单糖标准品量（x）即可得到标准曲线以及对应的线性回归方程，线性回归方程和相关系数如表1所示。

表1 标准单糖含量测定的线性回归方程和相关系数

2.4 中药柿霜样品中糖组分的含量分析

由表1中的线性回归方程和图2、3中所示4种单糖糖腈乙酸酯衍生物的峰面积，即可算得曹州和团风样品中各单糖组分的含量及其所占比例（表 2）。

表2 曹州样品和团风样品的糖组分分析

2.5 气相色谱法分析中药柿霜样品的精密度

将各相关标准品单糖糖腈乙酸酯衍生物取等量（1 μL）在同样的检测条件下，进行了5次重复试验，计算平行测定的相对标准偏差（RSD）。其中葡萄糖、核糖、阿拉伯糖、鼠李糖和岩藻糖的RSD分别为1.27%、1.54%、0.90%、1.38%、1.09%，均小于2.0%，可见该处理和检测方法重复性较好，精密度较高。

3 结论与讨论

3.1 糖腈衍生化方法

糖腈衍生化的方法能较好的实现中药柿霜样品多糖水解产物的衍生。衍生物经氯仿萃取后没有发现严重的色谱峰拖尾情况，适合单糖衍生化气相色谱法分析。柿霜样品多糖的水解较关键，试验过程中采用三氟乙酸解决了硫酸水解多糖的炭化问题。经试验探索，中药柿霜水解的最佳温度为120℃，最佳水解时间是5 h，这样处理杂质峰和异构峰较少。在处理单糖标准品水解时，第一阶段水解最佳时间为15 min，加入乙酸酐后的最佳水解时间为30 min，时间过长会导致杂质峰和异构峰较多，影响检测结果。水浴衍生化应在密封条件下进行。90℃水浴时，水蒸气较多，若不密封，进入试管会使乙酸酐分解成乙酸，使衍生化不完全，导致检测时杂质峰较多，结果不准确。

3.2 气相色谱方法

气相色谱法分析具有高分离效能、高检测效能的特点，分析结果准确，尤其是对于含量较低的组分。本试验采用中等极性的Rtx-1701毛细管色谱柱，在30 min内完成了7种单糖的分析，各单糖均能完全分离，分析过程中不产生异构峰，重复性较好，精密度较高，是一种较为准确可靠的分析方法。在色谱条件的选择上，2℃/min的升温程序既可以将7种单糖完全分离，又避免了升温过慢导致的时间过长。进样口选择240℃最为适合，若温度过高会产生个别峰重叠的结果，无法完全分离。柱温选择180℃，若低于180℃，分析周期过长；若柱温过高也会产生个别峰重叠的结果，影响检测。

3.3 糖组分分析

由分析结果可知，两种中药柿霜均含有较多的葡萄糖，但所占比例有一定的差异，曹州样品和团风样品分别含有27.65%和23.67%的葡萄糖。曹州柿霜样品中还含有核糖、阿拉伯糖和鼠李糖，其中核糖和阿拉伯糖的含量也较多，鼠李糖的含量较少；而团风样品中含有核糖和岩藻糖，其中核糖含量较多，岩藻糖含量较少。通过对比可以发现，两种样品中核糖的含量比较接近。两种中药柿霜均未检测到甘露糖和半乳糖。可见不同来源的中药柿霜在糖的组分上存在着较大的差异。

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