唐 敏 ，夏 红 ，何丽华 ，杨小红 ，谢宛玉

（1.南华大学第一附属医院，湖南 衡阳 421001；2.南华大学肿瘤研究所，湖南 衡阳 4210012；3.湖南师范大学医学院，湖南 长沙 410013）

紫花牡荆素(5,3'-dihydroxy-3,6,7,4'-tetramethoxyflavone,casticin,CAS)是一种具有广泛药理活性的多甲基黄酮类化合物，近年来文献报道CAS对多种肿瘤细胞有抑制增殖和诱导凋亡的作用[1]，引起了人们的广泛关注。在我们的前期实验研究中，已证实CAS具有诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡作用，且其诱导细胞凋亡可能是通过caspase-3级联而实现的[2]。本研究通过检测CAS处理HO-8910细胞内活性氧生成和细胞膜电位改变，并行抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预实验，探讨CAS诱导HO-8910细胞凋亡作用是否涉及活性氧介导的线粒体膜去极化作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料

CAS由湖南师范大学药物工程实验室曹建国教授惠赠。人卵巢癌HO-8910细胞株购自中南大学湘雅医学院细胞中心。RPMI-1640（Gibco公司）；新生小牛血清 （杭州四季青）；DMSO （Amresco公司）； NAC、H2DCFH-DA 试剂盒、Rh123（Beyotime）和AnnexinⅤ/PI双染试剂盒购自南京凯基公司。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养

用含10%小牛血清的RPMI-1640培养基于37℃、5%CO2饱和湿度下培养。细胞贴壁生长于培养基中，取对数生长期细胞用于实验。

1.2.2 AnnexinⅤ/PI双染色FCM分析

参照文献[3]方法，取同步化处理24 h的HO-8910细胞，用含不同受试物的10%小牛血清的培养基继续培养，使CAS终浓度为2,4 μg/mL；溶媒对照组终浓度为0.2%DMSO；NAC对照组终浓度为 10 mmol/L NAC；NAC（mmol/L）干预组则取 NAC 10 mmol/L预孵育1 h后再加入CAS终浓度为2，4 μg/mL共孵育48 h。 收集细胞，用冰PBS洗2遍，1000r/m,5min离心，弃上清，按Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒使用说明书步骤进行Annexin V-FITC及碘化丙啶避光染色，半小时内上流式细胞仪检测。以上实验重复3次。……