田 莉，周 蓓，盛习锋，杨小红，曹建国

（湖南师范大学医学院，湖南 长沙 410013）

紫花牡荆素(5,3′-二羟基-3,6,7,4′-四甲氧基黄酮类化合物，Casticin，CAS)是一种多甲氧基黄酮类化合物。C-3′和C-5羟基以及C-3和C-4′甲氧基是黄酮类化合物具有强效细胞毒作用所必需的基团[1]，紫花牡荆素含有这些活性必需基团。有研究报道紫花牡荆素能抑制包括人宫颈癌HeLa细胞在内的多种肿瘤细胞增殖和生长[2-5]。线粒体在调节包括药物诱导细胞凋亡等各种凋亡过程中具有重要的作用。本文旨在研究CAS是否通过线粒体凋亡途径诱导HeLa细胞凋亡。

1 材料和方法

1.1 细胞与细胞培养

人宫颈癌HeLa细胞购自中国典型培养物保藏中心(中国武汉市)，用含10%小牛血清的RPMI-1640培养基，加100 U/mL青霉素，100 U/mL链霉素，置于37℃，5%CO2饱和湿度的细胞培养箱内培养，2天传代一次，取对数生长期细胞用于实验。

1.2 药品与试剂

紫花牡荆素(CAS)(成都普瑞法科技开发公司产品)；细胞凋亡ELISA检测试剂盒(罗氏公司出品)；DNA Ladder检测凋亡试剂盒(北京博大泰克公司产品)；碘化丙啶(PI；Sigma 公司)；溴化乙锭(EB；Sigma公司)；罗丹明-123(Rh123；Molecular Probes公司)；Caspase-3/9活性检测试剂盒 (Millipore公司)；鼠抗人 cyto C、Bax、Bcl-2、Bcl-xL、XIAP、β-actin 单克隆抗体和山羊抗鼠IgG抗体 (Santa Ceuz生物科技公司)；辣根过氧化酶藕联抗鼠二抗(Cell Signaling技术公司)。

1.3 凋亡ELISA试剂盒测定组蛋白/DNA碎片

细胞消化成单细胞悬液，接种于96孔板中，每孔10000个细胞，培养24 h，分组加药，10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养24 h，PBS稀释细胞悬液。反复冻融使细胞破坏并放出细胞内成份。3000r/min离心20 min，收集上清作为待测样品。用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。在标准品孔中加入标准品50 μL，待测样本孔中先加入待测样本 10 μL，再加样本稀释液 40 μL，空白对照孔不加，37℃水浴30 min。……