拟南芥抗旱突变体的筛选和鉴定
2012-09-28张娇娇慈凌坤卢云峰曹树青
张娇娇, 江 力, 杨 杰, 慈凌坤, 卢云峰, 曹树青
(1.合肥工业大学 生物与食品工程学院,安徽 合肥 230009;2.合肥师范学院 生命科学系,安徽 合肥 230061)
干旱是影响植物生长和发育的主要环境因子之一。全球约有43%的耕地为干旱、半干旱地区,严重影响植物的生长发育,造成树木和农作物严重减产。干旱已经成为世界范围内严重影响农作物产量的逆境胁迫之一[1-2],对抗旱作物的育种及抗旱机理的研究具有深远重大的意义。
拟南芥是分子生物学研究的模式植物,它的完整基因组已被成功测定,为研究新基因、基因功能方面提供很多依据。本实验利用甘露醇模拟干旱胁迫筛选拟南芥抗旱突变体,并通过对其形态学及生理生化指标的测定来鉴定抗旱突变体。该研究不仅为抗旱基因克隆及功能分析奠定基础,对于进一步探索水分胁迫信号转导及其应答干旱胁迫分子机制也具有重要的意义。
1 材料与方法
1.1 材料与培养
本实验所用拟南芥(Arabidopsis)生态型为Columbia,野生型(WT)和突变体(Mutant)来自美国拟南芥种质资源中心[3],实验采用2种方法培养植株[4-5]:
(1)培养基培养。种子经0.1%HgCl2消毒3min后,用无菌水冲洗4~5次,然后将种子点种在加入1.5% 蔗糖和0.8% 琼脂的培养基中;并用封口膜封装,于4℃条件下处理2d后转至光周期16h光/8h暗、光照100μmol/(m2·s2)、温度22~23℃的培养室。
(2)土壤培养。① 幼苗移至装有混合好的灭菌营养土的盆钵中,置于光周期16h光/8h暗、光照100μmol/(m2·s2)、温度22~23℃的培养室内,移栽和开花时各浇1次营养液,并根据植株生长需要浇以适量水;② 种子播种于装有灭菌土的盆钵中,浇含有不同浓度甘露醇的营养液,置于光周期16h光/8h暗、光照100μmol/(m2·s2)、温度22~23℃的培养室内培养。……