范旭东， 董雅凤， 张尊平， 任 芳， 裴光前

（中国农业科学院果树研究所国家落叶果树脱毒中心，兴城 125100）

葡萄卷叶病在全世界普遍发生，危害极其严重。现已报道的葡萄卷叶伴随病毒共有11种，分别为GLRaV－1～9、GLRaV－Dr和 GLRaV－De［1］。裴 光前［2］等人于2010年在国内首次报道了葡萄卷叶伴随病毒4和5，至此我国已鉴定明确的葡萄卷叶伴随病毒种类共有6种，即GLRaV－1～5和7。目前，检测葡萄卷叶病毒的方法主要有指示植物法、酶联免疫吸附法（ELISA），反转录聚合酶链式反应（RTPCR）和实时荧光PCR法。指示植物法是把待检材料嫁接到敏感寄主上，通过寄主症状表现来鉴定其带毒情况。指示植物法不能有效地区分葡萄卷叶伴随病毒的种类，且耗时较长。目前，国内外已经制备出多种葡萄卷叶伴随病毒抗体，用于ELISA检测［3－5］。ELISA 方 法 可 以短时间 内 检 测 较 多 的 样品，但需要依赖商品化检测试剂盒，费用较高，且灵敏度不及RT－PCR方法。RT－PCR具有快速、高效、灵敏的特点，已广泛运用于葡萄卷叶病毒的检测［6－7］。实时荧光 PCR 法是在 RT－PCR方法基础上发展起来的一种可以封闭、实时定量的检测方法，具有较高的灵敏度，目前主要运用于单一葡萄病毒的检测［8］。采用简并引物和多重PCR可以同时检测2种以上病毒，能够大幅度提高检测效率，降低检测费用。对于葡萄卷叶伴随病毒的相关研究已有部分报道［2，10－11］，但针对 GLRaV－4和5的研究报道极少［9］。我国葡萄卷叶伴随病毒4和5的研究刚开始起步，简便、快速、灵敏、高效的检测方法的建立对今后这两种病毒的田间调查及脱毒检测具有重要意义。……