杨家强， 王相晶， 郭兆将， 朱 勋， 吴青君＊，谢 文， 王少丽， 徐宝云， 张友军

（1.东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030；2.中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081）

简单重复序列间区（inter simple sequence repeat，ISSR）是由 Zietkiewicz等人［1］开发的一种基于SSR的分子标记。这种新型方法用锚定的微卫星DNA为引物，即在SSR序列的3′端或5′端加上2～4个随机核苷酸，扩增反向排列的间隔不太长的2个SSR之间的序列，可以通过PCR技术揭示基因组中微卫星序列的变异。与微卫星及其他分子标记相比，ISSR标记具有操作简单，DNA用量少，可重复性好，成本低，呈孟德尔遗传，无须预知研究对象的基因组序列等特点，其所揭示的多态性比RFLP、RAPD和SSR更高，具有广泛的应用前景。这种方法常被应用于亲缘关系鉴定［2－4］、种质资源和遗传多样性研究［5－7］，并被作为构建遗传图谱的工具［8］。

虽然ISSR－PCR具有重复性好的特点，但是IS－SR－PCR是基于PCR反应的分子标记方法，Mg2＋浓度、dNTPs浓度、引物浓度以及Taq酶和模板DNA用量都会影响ISSR－PCR反应扩增效果［9］，而且ISSR－PCR最佳反应体系在不同的物种中各不相同［10］。小菜蛾（Plutella xylostella）是影响十字花科蔬菜产量和质量最重要的害虫，因其繁殖率高、世代重叠严重、易产生抗药性，因此防治困难。Saw等利用mtCOI基因标记研究了澳大利亚小菜蛾，发现澳大利亚不同地理种群小菜蛾的mtDNA分化程度较低［11］。Endersby等通过对澳大利亚、新西兰等17个地区的小菜蛾进行SSR标记研究，发现澳大利亚小菜蛾种群与韩国、马来西亚种群存在较大的遗传分化［12］。由于ISSR－PCR各因素之间相互影响，为了保证ISSR－PCR结果的重复性和可靠性，必须搞清楚各因素之间的相互作用，所以非常有必要对小菜蛾ISSR－PCR反应体系进行优化，建立最佳反应体系。……