盛博文，杨海君，关向杰

（湖南农业大学生物安全科学技术学院，湖南 长沙 410128）

乳链菌肽即乳酸链球菌肽，又称乳酸链球菌素，它是乳酸链球菌所分泌的一种具有抗菌活性的多肽[1-2]。乳链菌肽自发现以来，人们对其基因学、理化特征、微生物学和生物活性研究非常广泛。从20世纪50年代发现乳链菌肽至今，已在60 多个国家得到广泛的应用，主要作为牛奶、乳酪、水果罐头和蔬菜罐头等的生物防腐剂[3]。笔者将从酸菜发酵水中分离得到的乳酸链球菌，通过凝胶过滤及反向层析等方法，从该菌发酵液中筛选分离出具有广谱抗菌活性的物质，并对其抗菌效果进行检测，初步探索了其杀菌机理。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 供试菌种 乳酸链球菌（从酸菜发酵液中分离获得并保存）；金黄色葡萄球菌（ATCC25923）（中国兽医微生物菌种保藏管理中心）；大肠杆菌（ATCC25922）（中国农业科学院植物保护研究所）；绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、耶尔森菌、粪肠球菌（黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心）。

1.1.2 培养基 LB 液体培养基：胰化蛋白胨10 g，酵母提取物5 g,NaCl 10 g, 用5 mol/L NaOH 调pH至7.0，用去离子水定容至1 L；MH 固体培养基：牛肉粉6 g，可溶性淀粉1.5 g，酸水解酪蛋白17.5 g，琼脂17.0 g，将其溶于1 L 去离子水中，pH 值7.3。

1.1.3 仪器与试剂 仪器：低温超速离心机、冻干机、AKTA 蛋白纯化系统（GE 公司）、制备型反相高效液相色谱LC-8A、半制备C18 柱（ACE）、Sephadex G-25 填料（GE 产品）、超纯水机（ROP-100）、紫外可见分光光度计（UV-3200PC）；试剂：乙腈（Merck 公司）、0.01 mol pH 值6.0 磷酸盐缓冲液、TFA（三氟乙酸）（HPLC 级）。

1.2 方 法

1.2.1 粗提物的获得 将乳酸链球菌划线培养，挑取单个菌落，接种在4 mL LB 液体培养基中过夜培养，然后再将其转移至200 mL LB 液体培养基中，培养7～8 h。……