房新辉 杨玉秀(河南省人民医院消化内科，河南 郑州 450003)

肝细胞癌(HCC)是临床上最常见的恶性肿瘤之一，每年新发50万～100万例，我国约占半数，已成为肝癌发病最集中的地区之一。CD24是一种低分子量高度糖基化的黏附分子，具有多种功能性的糖基化模式。体外培养和动物模型已经证实，CD24对多种肿瘤的生长和转移具有调节作用。目前，有关CD24在HCC发生发展中的生物学作用和临床意义尚不明了。本研究拟探讨CD24在HCC中的作用及其与临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 河南省人民医院70例肝脏疾病患者纳入本研究，男34例，女36例，年龄34～58〔平均(46±8)〕岁。其中肝血管瘤手术切除的周围正常肝组织20例，肝硬化手术切除肝组织20例，HCC手术切除组织30例，均经病理检查证实。肝硬化、HCC患者血清乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阳性。参照Edmendsen标准，HCC病理分级为Ⅰ级7例、Ⅱ级8例、Ⅲ级10例、Ⅳ级5例。三组病例年龄及性别有可比性。标本取出后置于液氮迅速冷冻，－80℃冰箱冻存待用。所取组织新鲜，并经过患者知情同意。

1.2 方法

1.2.1 寡核苷酸基因芯片分析 按照Invitrogen公司的Trizol试剂盒操作程序，总RNA提取、cRNA合成、芯片杂交和检测、数据分析等方法见文献〔1〕。

1.2.2 反转录PCR (1)抽提总RNA:用Trizol试剂(QIAGEN公司)分别抽提正常肝组织、肝硬化和HCC组织总RNA。(2)扩增引物设计:内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)上游引物:5'GGGAAACTGTGGCGTGAT 3'，下游引物:5'AAAGGTGGAGGAGTGGGT 3';扩增片段长度309 bp。目的基因CD24上游引物:5'CTGCTGGCACTGCTCCTA 3，下游引物:5'AGAGTGAGACCACGAAGA 3';扩增片段长度178 bp。(3)CD24 cDNA合成及PCR扩增:按RT-PCR试剂盒(TaKaRa公司提供)步骤进行反转录聚合酶链反应。先合成cDNA，再进行PCR。扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。……