鹅细小病毒P C R检测方法的建立及初步应用
2012-09-20鞠环宇荆志强李彦伟王春媛王君伟
东北农业大学学报 2012年3期
王 倩,鞠环宇,荆志强,李彦伟,王春媛,马 波,王君伟
(东北农业大学动物医学学院,哈尔滨 150030)
鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)病是一种主要侵害雏鹅和雏番鸭的急性、亚急性、高度接触性传染病,其传染性强,死亡率高,部分病例在病鹅小肠段出现“香肠”状栓,是目前危害养鹅业的主要传染病之一[1]。一般认为,小鹅瘟根据流行病学、临床特征和剖检特点,可以做出初步诊断,但是,最急性型小鹅瘟、小鹅流感、鹅病毒性肠炎以及近年来新发现的鹅副粘病毒病等疾病均具有相似的临床和剖检特征[2-3]。为此,开展小鹅瘟的实验室诊断研究具有重要意义。
目前已建立了许多检测小鹅瘟病原的方法,如病毒分离试验、ELISA[4]、Dot-ELISA[5]、反向间接血凝抑制试验[6]、中和试验、核酸探针[7]等,其中ELISA对人员和试剂的要求较高,且需要特异性抗体,病毒分离和中和试验耗时较长,且鹅胚的不均一性对试验结果影响较大,总之这些方法在临床应用上都没有达到较满意的效果。PCR作为一种新的分子生物学实验技术,在疾病诊断中发挥着越来越重要的作用,该方法具有灵敏度高、快速特异、操作简便等优点。布日额[8]、姚笛[9]、刘家森[10]等建立了检测小鹅瘟的单重PCR方法,赵研[11]等建立了二重PCR方法,程安春建立了实时荧光定量PCR方法以及尚毅建立了LAMP方法,但这些方法都是以一株GPV为参考序列的[12-13]。本试验以NCBI上公布的7株为参考序列,旨在建立一种能够检测病料组织中所有GPV的特异性PCR方法,为临床诊断GPV感染和探索各组织器官中GPV的分布规律提供有效手段。……
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