马 伟 贾艳姝 李 娜 龚 贺 张艳贺

(黑龙江中医药大学，哈尔滨，150040)

蒙古黄芪［Astragalus membranaceus(Fish.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao］为名贵中药材。但目前对其过度的采挖，已造成传统道地黄芪已远远不能满足市场需求［1－2］。因此从天然药用微生物的角度出发，分离有价值的黄芪内生真菌对保护野生资源具有重要意义［3－7］。

1 材料与方法

1.1 仪器及试药

试验仪器:FA2004型电子分析天平(上海良平仪器仪表有限公司);DZKW－C型仪表恒温不锈钢水浴锅(上海樹立仪器仪表有限公司);手提式压力锅(上海申安医疗器械厂);CLASSⅡTYPE B2洁净工作台(北京东联哈尔仪器制造有限公司);HZQF160震荡培养箱(中国哈尔滨市东联电子科技开发有限公司);隔水式恒温培养箱(上海－恒科技有限公司);Nikon－80i显微镜(JAPAN);平板培养皿、三角瓶(上海五一玻璃仪器厂)。

试验试药:牛肉膏、酵母提取物、胰化蛋白胨、蛋白胨、可溶性淀粉(北京奥博星生物技术有限责任公司);琼脂(JAPAN.OXOID ENGLAND);葡萄糖(分析纯，天津基准化学试剂有限公司);医用酒精(齐齐哈尔市鹤城消毒剂厂)。

植物材料为蒙古黄芪［Astragalus membranaceus(Fish.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao］的健康植株，采集时间为2009年10月，采集地点为黑龙江省农科院园艺分院黑龙江中医药大学黄芪试验田。

1.2 方法

1.2.1 试剂的制备

PDA(A)——PDA粉末与蒸馏水配制而成;牛肉膏蛋白胨固体培养基(B)——牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaCI 5 g，琼脂20 g，水1000 mL，pH=7.4 ～7.6;LB(Luria－Bertani)固体培养基(C)——胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g，琼脂20 g;高氏 I号培养基(D)——可溶性淀粉 20 g，KNO 31 g，NaCl 0.5 g，K2HPO40.5 g，MgSO40.5 g，FeSO40.01 g，蒸馏水1000 mL，琼脂20 g，pH=7.4 ～7.6。

1.2.2 内生真菌的分离纯化及培养基的筛选

组织培养:选择无病斑新鲜黄芪根块冲洗干净，晾至表面无水珠，取主根切成约3 cm长的小段，注意保持切口的整齐。……