宋 爽 蒋文宏 蒋永平，，*(中国医学科学院 北京协和医学院 苏州方舟生物医药研发中心，苏州 56)

2(苏州方舟基因药业有限公司，苏州 215126)

新一代重组人粒细胞集落刺激因子的工业化发酵、复性和纯化

宋 爽1蒋文宏2蒋永平1，2，*1(中国医学科学院 北京协和医学院 苏州方舟生物医药研发中心，苏州 215126)

2(苏州方舟基因药业有限公司，苏州 215126)

工业化大规模发酵、复性和纯化突变型人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa)，并测定其体外生物学活性。利用定点突变和DNA重组技术获得突变型G-CSF(rhG-CSFa)。通过40 L发酵罐发酵基因工程菌株获得rhG-CSFa包涵体，经过一系列透析后，通过离子交换柱和分子排阻层析进行纯化，并使用高效液相色谱技术对纯化后的rhGCSFa进行纯度分析。利用G-CSF依赖细胞株(M-NFS-60)测定纯化后的rhG-CSFa体外活性效价。结果表明，rhGCSFa表达量占全菌蛋白的31.2%，通过优化复性条件，rhG-CSFa复性率达到11.36%，纯化后rhG-CSFa的纯度达到99.11%。体外活性实验显示，与野生型G-CSF相比，rhG-CSFa在相同浓度下能诱导 NFS－60细胞株获得更高的细胞增殖率。rhG-CSFa工程菌株能够高表达rhG-CSFa，可用于工业化大规模生产，生产的rhG-CSFa具有较高的生物活性、稳定性和纯度。rhG-CSFa大规模生产的成功为该药物未来的临床运用打下了良好的基础。

重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF);发酵;复性;纯化;生物活性

引言

人粒细胞集落刺激因子(human granulocyte colony stimulating factor，hG-CSF)是由人体内皮细胞、单核细胞、巨噬细胞及成纤维细胞分泌的一种糖蛋白。它由174个氨基酸组成，能够促进骨髓内粒细胞前体的增殖、分化［1］。近年来研究表明，GCSF对于造血干细胞有着比较强的动员能力，因此在骨髓移植中有着广泛的应用［2］，但其对于造血祖细胞未见有直接的影响［3］。……