王 吉，卫 礼，贺争鸣，岳秉飞

(中国食品药品检定研究院、国家实验动物微生物、遗传检测中心，北京 100050)

呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法的建立

王 吉，卫 礼，贺争鸣，岳秉飞

(中国食品药品检定研究院、国家实验动物微生物、遗传检测中心，北京 100050)

目的 建立呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法，应用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。方法 根据已发表的呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)M1基因序列，设计合成引物。提取Reo3细胞毒RNA，以其为模板，进行PCR扩增。优化反应条件，进行特异性、敏感性、重复性试验。结果 建立的Reo3 RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以Reo3 RNA逆转录产物为模板，所能检测RNA最小模板浓度为0.42pg/μL，可检测病毒最小滴度为10－9/mL。结论 建立的呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法可用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。

呼肠孤病毒Ⅲ型;反转录聚合酶链式反应;实验动物;人用动物源性材料及生物制品

呼肠孤病毒3型(Reo3)为呼肠孤病毒科的正呼肠孤病毒属的代表株。病毒粒子无囊膜，直径70nm左右。病毒基因组是分节段双股RNA(dsRNA)，全基因组分为 L(L1、L2、L3)、M(M1、M2、M3)、S(S1、S2、S3、S4)3 组共 10 个节段基因组成，共编码11种蛋白，其中8种结构蛋白，3种非结构蛋白。此种病毒可感染所有哺乳动物，包括猪、牛、小鼠、地鼠、豚鼠、猫和犬等［1－4］。并且能在人、猴、豚鼠、地鼠、猫、狗、猪和牛的原代肾细胞以及Hela、KB、FL和L细胞等传代细胞中增殖并引起细胞病变。Reo3也能感染人，能引起儿童腹泻、呼吸道感染及脑膜炎等疾病［4－6］。由于上述动物和细胞存在Reo3的自然感染，不仅会给动物实验带来干扰，而且用上述动物源性材料或细胞生产的人用生物制品也可能存在Reo3的潜在污染，对人用动物源性材料及动物源性生物制品的使用安全造成潜在威胁［7］。……