李宏 姜英辉 张健 赵丽青 雷质文 梁成珠

(1.中国合格评定国家认可委员会 北京 100062;2.山东出入境检验检疫局)

1 前言

志贺氏菌(Shigella spp.)俗称痢疾杆菌，是引起人细菌性痢疾的肠道病原菌。按照抗原结构和生化反应的不同，可分为痢疾、福氏、鲍氏和宋内氏志贺菌。志贺氏菌只需少量就可以发病，极易引起爆发性流行，尤其对幼儿可引起急性中毒性菌痢。由于该菌的死亡率高，对人类生命安全和社会稳定有较大影响，根据世界卫生组织报道，每年全球痢疾的发病人数高达2亿，其中1.632亿分布于发展中国家，是危害最广的流行病之一［1］。因此，开发一种快捷的检测方法对志贺氏菌的防控将有很大的意义。

志贺氏菌检测的主要方法有生理生化鉴定技术［2］、酶联免疫吸附技术［3］和聚合酶链式反应技术(PCR法)［4］等，前两种方法操作繁琐、检验周期长、工作量大，PCR方法虽然快速、灵敏，但需要昂贵的PCR仪。依赖核酸序列恒温扩增(Nucleic Acid Sequence－based Amplification，NASBA)技术是一项以核酸序列中RNA为模板的快速恒温扩增技术［5］，本研究尝试选取志贺氏菌的基因ipaH作为检测靶基因［6］，自行设计特异性引物，建立检测志贺氏菌的NASBA检测方法。

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 实验菌株

本研究所用的11株实验菌株(表1)分别购自美国典型菌种保藏中心(ATCC)和中国医学细菌保藏管理中心(CMCC)。

表1 试验用菌株

4肠炎沙门氏菌 S a l m o n e l l a e n t e r i t i d i s A T C C 1 3 0 6 7 1 5小肠结肠炎耶尔森氏菌 Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a C M C C(B)5 2 2 0 7 1 6大肠埃希氏菌 E s c h e r i c h i a c o l i A T C C 2 5 9 2 2 1 7弗氏柠檬酸杆菌 C i t r o b a c t e r f r e u n d i i A T C C 4 3 8 6 4 1 8产酸克雷伯氏菌 K l e b s i e l l a o x y t o c a A T C C 4 3 1 6 5 1 9阴沟肠杆菌 E n t e r o b a c t e r c l o a c a e A T C C 7 0 0 3 2 3 1 1 0 气味沙雷氏菌 S e r r a t i a o d o r i f e r a A T C C 3 3 0 7 7 1 1 1 副溶血性弧菌 V i b r i o p a r a h a e m o l y t i c u s A T C C 1 7 8 0 2 1

2.1.2 主要试剂

AMV反转录……