张春玉，宋 凯，高立宏，，郭立泉，李望丰，刘立侠

（1.长春职业技术学院食品与生物技术分院，吉林 长春 130033；2.东北师范大学生命科学学院，吉林 长春 130024；3.长春师范学院生命科学学院，吉林 长春 130032）

土壤盐渍化是威胁农作物生产的非生物胁迫因素之一［1］.在盐胁迫条件下，高等植物主要是通过Na＋／H＋逆向转运蛋白来实现Na＋外排，抗拒盐离子毒害［2－4］.随着人们相继在多种植物及酵母的生物膜上观察到Na＋／H＋逆向转运蛋白的活性［5－6］，有关质膜Na＋／H＋逆向转运蛋白的研究受到学术界的广泛关注.高等植物的一些盐胁迫应答反应的分子机制与酵母细胞具有相似性，因此，利用酵母系统来分离鉴定功能保守的高等植物基因被认为是一条行之有效的快捷途径［7－9］.

近年来，关于植物中Na＋／H＋逆向转运蛋白的研究已有很多报道，但是关于盐地植物猪毛菜（Salsola collina Pall）Na＋／H＋逆向转运蛋白基因的研究报道却很少.本研究首次成功地从盐生植物——猪毛菜中克隆了液泡膜型Na＋／H＋逆向转运蛋白基因SsNHX1，并对其耐盐能力进行了验证，这对挖掘盐地植物优质耐盐基因资源具有重要意义.

1 实验部分

1.1 材料与试剂

猪毛菜采自于吉林省西部盐碱地区.酵母表达载体pPIC9和菌株GS115购于Invitrogen公司；克隆载体pMD18－T购于大连宝生物公司TaKaRa公司；DNA限制性内切酶，Taq酶，T4DNA连接酶，RNA PCR kit，DNA凝胶回收试剂盒，质粒提取试剂盒，DNA Marker购自大连宝生物公司.PCR引物合成和基因测序均由上海生工生物公司完成.

1.2 实验方法

1.2.1 SsNHX1基因编码区克隆

根据SsNHX1基因全序列设计引物I（含Bam HI酶切位点）和J（含……