黄川峰

脑缺血再灌注损伤是由于缺血缺氧后，脑细胞在再灌注情况下发生损伤，在此损伤过程中，有多种机制参与，其中炎症反应、氧自由基损伤、钙超载的等起着重要作用。研究认为，脑缺血下诱导的炎症细胞因子如白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等表达在脑缺血再灌注损伤中其着重要作用。醒脑静注射液是由麝香、栀子、郁金、冰片等成分制成，具有清热泻火，凉血解毒，开窍醒脑之功效。本文观察醒脑静注射液对脑缺再灌注损伤小鼠血清IL-6和TNF-α水平影响。

1 材料和方法

1.1 动物 选择健康昆明雄性小鼠共60只，由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供，体重为20～22 g，SPF级。

1.2 试验仪器、试剂和药物 主要试验仪器:γ-放射免疫计数器、离心机等。醒脑静注射液(河北天地药业股份公司生产，国药准字Z41020664，批号:110219);TNF-а和IL-6放免检测试剂盒(购于深圳市科润达生物工程有限公司)。

1.3 脑缺血再灌注损伤小鼠模型 各组小鼠均在25℃下无菌环境下手术造模，10%水合氯醛麻醉，剂量为350 mg/kg。麻醉成功后，仰卧位，四肢固定。分离双侧颈总动脉，4号丝线扣待用，拉紧丝线扣即可阻断血流，松开丝线扣，血流可再灌注。阻断血流后可见小鼠惊厥、呼吸深且慢、心率增加。阻断血流10 min后丝线扣松开血流灌注10 min，而后再次拉紧丝线扣阻断血流10 min，再次松开丝线扣再灌注血流10 min。观察小鼠呼吸心跳，如平稳，可关闭切口。而假手术组仅仅分离出颈总动脉，不阻断血流及再灌注。

1.4 试验分组和给药方法 试验分为5组:假手术组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组小鼠12只。5组均在术后的第二天给药。假手术组和模型组给予生理盐水腹腔注射，体积同其他三组。高、中、低三个剂量组均在造模后第2天给予醒脑静注射液，剂量分别为10 ml/kg、5 ml/kg、2.5 ml/kg，稀释为0.5 ml后腹腔注射。1次/d，连续注射液5 d。

1.5 指标测定 各组小鼠在末次给药后12 h后采用摘除眼球法取血，离心后取血清，采用放射免疫法测定小鼠血清IL-6和TNF-α水平。具体测定步骤依据试剂盒提供的步骤进行。

1.6 统计学方法 采用统计学软件SPSS 14.0进行统计学分析，各组均数比较采用单因素方差分析，组件比较采用t检验，P＜0.05显示差异有统计学意义。

2 结果

各组IL-6和TNF-α水平测定结果比较:模型组IL-6和TNF-α水平分别高于假手术组，差异有统计学意义(P＜0.05);高、中、低剂量组IL-6和TNF-α水平分别低于模型组，差异有统计学意义(P＜0.05);高剂量组IL-6和TNF-α水平分别低于中剂量组，差异有统计学意义(P＜0.05);中剂量组IL-6和TNF-α水平分别低于低剂量组，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 各组IL-6和TNF-α水平测定结果

3 讨论

白介素-6属于一种重要的炎症细胞因子。但是，在正常状态下，白介素-6水平很低，其在脑内的表达处于低水平状态。但是当脑发生缺血再灌注损伤后，中性粒细胞和巨噬细胞的浸润加强，此时白介素-6表达水平升高。而肿瘤坏死因子-а在脑组织中主要是由星形细胞和小胶质细胞分泌，肿瘤坏死因子-а具有多方面生理作用，它可介导白介素-6等多种炎症介质，对免疫过程也有不同程度的调节作用，而肿瘤坏死因子也参与脂质代谢，同时对糖的代谢也有一定的影响［1-3］。当脑组织发生缺血缺氧及血流再灌注时，肿瘤坏死因子-а通过刺激损伤的血管内皮细胞，提高白细胞对血管内皮粘附作用，内皮细胞相关状态发生改变，导致血栓素A2、内皮素等缩血管物质释放增加，从而导致血管收缩，引起血管闭塞。肿瘤坏死因子-а能够促使兴奋性氨基酸释放水平提高，神经毒性增强。研究表明，炎症反应在脑缺血再灌注损伤中起着重要作用。而在脑缺血再灌注损伤中，IL-6和TNF-а等炎性细胞因子的释放增加，同时二者水平增加可导致级联反应，使血脑屏障受损，局部脑组织发生肿胀，导致神经元损伤，引发局部神经功能缺损症状［4，5］。

本文结果显示，模型组IL-6和TNF-α水平分别高于假手术组;高、中、低剂量组IL-6和TNF-α水平分别低于模型组;高剂量组IL-6和TNF-α水平分别低于中剂量组;中剂量组IL-6和TNF-α水平分别低于低剂量组。说明IL-6和TNF-а在脑缺血再灌注损伤中表达水平升高，参与了脑缺血再灌注损伤，而醒脑剂注射液能够降低IL-6和TNF-α表达，对脑缺血再灌注损伤中的炎症反应有一定的抑制作用。但醒脑静注射液对脑缺血再灌注损伤中的氧自由基损伤、钙超载等机制是否有影响，尚待进一步研究。

［1］ 向赞，董大翠，刘庆莹.脑缺血与白细胞介素-6的变化.江汉大学学报(自然科学版)，2005，23(2):83-87．

［2］ 张莉莉，王景周，周华东，等.肿瘤坏死因子-a在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用机制.中华老年医学杂志，2003，22(2):102-104．

［3］ Caso JR，Moro MA，Lorenzo P，et al.Involvement of IL-1 beta in acute stress induced worsening of cerebral ischaemia in rats.Eur Neuropsychopharmacol，2007，17(9):600-607．

［4］ 吴建华，方云祥.法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响.中国临床药理学与治疗学，2008，13(4):377．

［5］ 陈寿权，王万铁，王明山，等.醒脑静对家兔脑缺血再灌注时TNF、IL-1、IL-6水平及脑超微结构影响的实验研究.中国急救医学，2000，20(11):637．