李桂兰，张映，邵国青

（1．山西农业大学 动物科技学院，山西 太谷030801；2．江苏省农业科学院 兽医研究所，江苏 南京210014）

猪支原体肺炎（Mycoplasma Pneumoniae of Swine，MPS，又名猪地方流行性肺炎和猪气喘病）是由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）引起的慢性呼吸道病，主要症状为咳嗽和气喘，该病发病率高、死亡率低，主要引起猪的饲料转化率下降和生长受阻。MPS流行范围广，常与其他肺部病原如猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪流感病毒（SIV）及圆环病毒Ⅱ型（PCV－2）等协同作用，形成猪呼吸道病综合征（Porcine Respiratory Disease Complex，PRDC），导致死亡率升高，损失加剧，已成为现代养猪业的主要危害之一［1，2］。

猪肺炎支原体培养条件要求苛刻，易被其他支原体的生长而掩盖，因此病原的分离培养在临床诊断中的应用受到很大限制。血清学检测法与其他支原体存在严重的交叉反应，也给Mhp的诊断带来很大困难［3，4］。随着分子生物学的快速发展，核酸探针法已应用于多种病原微生物的检测，其中斑点杂交检测法具有快速、准确和易操作的优点。P36蛋白是Mhp的一种免疫优势蛋白，具有种特异性［5，6］。

本试验针对Mhp P36基因序列设计并合成一条地高辛标记的DNA寡核苷酸探针，通过条件优化建立了Mhp斑点杂交检测方法，并对猪肺样品进行检测，为Mhp的临床检测提供了快速准确的方法。

1 材料与方法

1．1 菌株和主要试剂

Mhp 168株冻干菌种：由江苏省农业科学院兽医研究所家畜重大疫病组保存。

猪鼻支原体（M．hyorhinis，Mh）、猪絮状支原体（M．flocculane，Mf）、猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）、副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPs）、猪圆环病毒Ⅱ（Porcine circovirus－2，PCV－2）、猪流感病毒（Swine influenza virus，SIV）和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 （Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRSV）的DNA或cDNA：均由江苏省农科院兽医所提供。……