刘媛媛，张小里，姚 娜，李红亚，赵彬侠

（西北大学化工学院，陕西 西安 710069）

磷脂酶D的紫外诱变选育及发酵条件的优化

刘媛媛，张小里，姚 娜，李红亚，赵彬侠

（西北大学化工学院，陕西 西安 710069）

磷脂酶D在催化磷脂酰基交换反应中具有重要的应用价值。本文对产磷脂酶D野生链霉菌株进行紫外诱变，筛选得到一株产酶活力提高42.5%的变异株。通过摇瓶培养，对发酵条件进行探究。确定的最佳培养基组成为：葡萄糖10.0 g/L，牛肉膏和蛋白胨各5.0 g/L，MgSO4·7H2O 1.0 g/L，CaCl23.0 g/L，NaCl 2.0 g/L；表面活性剂Tween80对产酶有促进作用，其适宜浓度为0.60 g/L。在上述条件下，摇瓶发酵产酶活力达3.23 U/mL。

磷脂酶D；诱变；磷脂酰基转移；发酵

磷脂酶D（phospholipase D，EC3.1.4.4，简称PLD)，即磷脂酰胆碱水解酶，能催化水解卵磷脂（PC）释放出磷脂酸和胆碱，在醇类物质存在下，一些PLD亦能催化磷脂酰基转移反应，将具有羟基的底物与胆碱的极性头部进行交换反应，生成新磷脂[1-3]。PLD催化的磷脂酰基转移反应可合成许多稀有或半合成磷脂，广泛应用于食品、医药等领域。据报道，稀有链霉菌株是磷脂酰基转移活力PLD主要生产菌，然而，野生菌株的酶产量普遍很低[4]。

本工作利用前期筛选得到的一株产磷脂酰基转移活力 PLD野生链霉菌株，通过紫外诱变筛选育种，改良菌株的产酶能力；并且，对所筛选高产菌株发酵生产磷脂酶D的最佳工艺条件进行探究。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 菌 种

磷脂酶D产生菌Streptomyces PLD0606，由本实验室保藏。

1.1.2 培养基

孢子萌发培养基（g/L）：酵母浸粉 10.0；蛋白胨 10.0；CaCl2，0.01 mol/L。

PDA 培养基（g/L）：马铃薯 200.0；葡萄糖20.0；琼脂 20.0。

发酵培养基（g/L）：葡萄糖 10.0；……