张建华，施恒亮，翟艳华，俞华莉，曹让娟，朱筱娟

（东北师范大学生命科学学院，吉林长春13 0024）

兔抗MyosinⅩ多克隆抗体的制备及初步应用

张建华，施恒亮，翟艳华，俞华莉，曹让娟，朱筱娟

（东北师范大学生命科学学院，吉林长春130024）

为制备兔抗肌球蛋白Ⅹ（m y o s i nⅩ，M y oⅩ）多克隆抗体，合成了含有M y oⅩN端1000～1021个氨基酸的多肽，将纯化后的多肽与钥孔戚血蓝蛋白（k e y h o l e l i m p e t h e m o c y a n i n，K LH）进行交联；通过背部皮下免疫新西兰大白兔获得免疫血清，并通过E L I S A、免疫印迹、免疫荧光等分析对免疫血清进行了初步的验证．结果表明：经过4次免疫后可获得免疫血清，E L I S A检测表明抗体终效价达到1∶51200，抗原吸附实验进一步证明了此多克隆抗体的特异性．利用获得的多克隆抗体检测了多种组织中M y oⅩ的表达，发现兔抗M y oⅩ多克隆抗体可特异性识别多种组织中的M y oⅩ．免疫荧光染色表明该抗体可以显示M y oⅩ在C O S－7细胞、N L T细胞和神经元中的分布．

肌球蛋白Ⅹ；多克隆抗体；半抗原

1 材料与方法

1．1 动物

新西兰大白兔，由北京华阜康动物中心提供，雌性，体重约2k g．

1．2 M y oⅩ分子N端多肽抗原的合成

参考H i r o s h i T o k u o和M i t s u o I k e b e的报道［10］，根据M y oⅩN端1000～1021氨基酸序列设计并合成多肽作为半抗原，多肽序列为N′－D D D D A F K D S P N P S HE GH S D QR T S－C′．免疫用抗原为C端交联载体蛋白K LH的完全抗原，由上海吉尔生化有限公司完成．合成多肽14μg，取其中10μg与K LH交联用于免疫动物，4μg非偶联的半抗原用于E L I S A检测抗血清效价．弗氏佐剂和羊抗兔

I g G－HR P为S i g m a公司产品．E C L反应试剂盒为G E－H e a l t h c a r e公司产品．

1．3 兔抗M y oⅩ多克隆抗体的制备

将完全抗原1m g溶于1m L P B S中，并与等体积的弗氏佐剂进行充分的乳化……