冯晓勤 刘元春

近年来，对骨髓间充质干细胞（MSC）的研究初步显示，其能促进造血干细胞移植后的供者细胞植入及抑制移植物抗宿主病（Graft Versus Host Disease， GVHD）的发生。但骨髓间充质干细胞对上述作用的免疫调控机制尚有待于进一步研究。基础研究已经发现GVHD的发生、发展与淋巴细胞趋化因子受体存在着相关性，本实验拟通过研究MSC对小鼠T淋巴细胞亚群增殖后表达趋化因子受体的变化，来更深入地了解MSC的免疫调控机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 8～12周龄的雄性C57BL/6小鼠，重量180～220 g，清洁级。由南方医科大学实验动物中心引进，南方医科大学动物中心无菌层流仓饲养。

1.1.2 主要试剂及仪器设备 LG-DMEM （美国，Gibco），植物血凝素PHA（美国，Sigma），小鼠CD3-CY-5单抗、小鼠CD4-FITC单抗、小鼠CD8-FITC单抗、小鼠CCR7-PE单抗、小鼠CCR5 -PE单抗、小鼠CXCR3-PE单抗（美国，ebioscience）。流式细胞仪（美国，FACScan，BD）。

1.2 实验方法

1.2.1 小鼠骨髓间充质干细胞的培养和分离 C57BL/6小鼠（8～12周龄）颈椎脱臼处死后置酒精中浸泡10 min，无菌条件下取小鼠双侧股骨及胫骨，无菌层流操作台上用注射器吸取含50μl/ml庆大霉素LG-DMEM培养液冲洗小鼠股、胫骨干骺端，分别采用4、7号针头抽吸含骨髓细胞的培养液，制成单细胞悬液，用含10%胎牛血清的LG-DMEM培养液接种于25 cm2培养瓶中，调整细胞密度为2×105/cm2。5%CO2，37 ℃饱和湿度培养，每24～36小时后去除悬浮细胞，每3～4天全量换液。待细胞融合达70%～80%后，0.25%胰蛋白酶EDTA消化，收集细胞传代培养，取3～8代细胞用于实验研究。

1.2.2 淋巴细胞增殖试验及实验分组 C57BL/6小鼠（8～12周龄）颈椎脱臼处死后置酒精中浸泡10 min，无菌条件下取脾脏置于PBS溶液中，剪切脾脏，200目钢筛过滤制成单细胞悬液，加入红细胞裂解液2 ml孵育2 min，PBS离心洗涤，24孔培养板每孔加入1×106细胞数，每孔含植物血凝素20 μg/ml。……