刘 帅，朱明鲲，刘 旭，李 玲

(华南师范大学生命科学学院，广东省植物发育生物工程重点实验室，广东广州510631)

ABF是一类AREB类转录因子，可以与ABA诱导基因的启动子区域结合调节下游靶基因的表达［1］．2000 年，UNO 等［2］和 CHOI等［3］分别从拟南芥中分离出4种bZIP蛋白，其中ABF1主要参与低温、ABA胁迫的应答反应;ABF3主要受 ABA、高盐、低温、热、氧化胁迫诱导;ABF2/AREB1、ABF4/AREB2则主要参与ABA、干旱、高盐、热和氧化胁迫应答反应［2］．AREBs转录因子特异存在于植物中，超表达和abf4突变体植株，分析它们对ABA和盐胁迫响应特点，揭示ABF3和ABF4的功能差异，为深入研究ABF在ABA信号途径的作用提供依据．

1 材料与方法

1．1 材料与处理

哥伦比亚生态型野生型拟南芥(Columbia，缩写为Col)．拟南芥突变体abf3(SALK 127755)和abf4(SALK 069523)购于拟南芥资源中心(Arabidopsis Biological Resource Center，ABRC)，经本实验室纯化鉴定．

ABA处理:种子消毒后，播种于含有不同浓度的ABA的1/2MS固体培养基上，4℃放置2 d，然后在光照培养箱中(昼夜温度为22°/20°，光照周期为16 h/8 h，平均湿度为40% ～60%)培养．

盐胁迫处理:种子播种于含有 0、100、200 mmol/L NaCl的1/2MS固体培养基上，4℃同步化处理2 d，然后光照培养箱中(昼夜温度为22°/20°，光照周期为16 h/8 h，平均湿度为40% ～60%)培养．

1．2 试验试剂及PCR引物

Taq DNA聚合酶、RNA提取试剂TRizol、DNase I(RNAase-free)、One Step RT-PCR试剂盒均购自TaKaRa;引物合成和PCR产物测序由上海英俊公司完成，名称及序列如下:2Bd3-LP(ABF4)5’-GGGTTTTAGGGCTTGGATGCT-3’，2Bd3-R(ABF)5’-TTCACAGGCGCAGAAAATGCT-3’，ABF3-F 5’-TTGATGGTGTGAGTGAGCAGC-3’，ABF3-R 5’-TGGCAAGAGTTGGACGTTGTG-3’，LBa1 5’-TGGTTCACGTAGTGGGCCATCG-3’;其他常规试剂均为国产分析纯．

1．3 试验方法

1．3．1 RT-PCR检测 按照 TaKaRa提供的 TR-izol使用方法提取南芥叶片RNA备用，使用one step RT-PCR对基因的转录产物进行基因表达鉴定．程序:50℃逆转录30 min，94℃终止反应2 min，94℃变性2 min，94℃变性 30 s，60℃退火30 s，72℃延伸70 s，28个循环，72℃延伸5 min．质量分数为1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物．

1．3．2 种子萌发率 种子经春比后，在光……