贺 勇，陈 嵌，唐治贵，刘容海，唐 佳，高中燕，米永华，袁作为

（1.重庆医科大学附属永川医院检验科 402160；2.重庆市南川区人民医院检验科 408400）

临床生化检验工作中，经常遇到被测项目的活力或浓度较高，超出测量线性范围，需稀释后再测。不同的方法、不同的测定项目以及不同的仪器对标本稀释液有不同的要求，不同稀释液在不同的检测系统中也会给测定结果带来不同的影响［1］。目前全自动生化仪器均没有配专用稀释液，选用何种稀释液既方便易得又不影响结果的准确性，各实验室的做法不尽相同，也缺乏系统评价［2－4］。近年来，干化学检测方法逐步推广，尤其在急诊和门诊中应用广泛，虽然部分厂家可以提供专用稀释液，但在实际临床工作中很少使用，也未见系统评价的报道。另一方面，由于干、湿2个检测系统的检测原理完全不同，相同稀释液在不同的系统中是否一致，目前也未见报道［5－6］。本实验拟用不同稀释液对肾功能3项——尿素 （Urea）、肌酐（Cr）、尿酸（UA），分别在干、湿2个检测系统上的检测结果进行评价与比较，以期找到与系统和项目相适应的理想稀释液。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 高值标本 收集本院患者新鲜血清，无明显溶血及肉眼可见的黄疸和脂血。其值均接近但未超出该项目的线性范围上限。

1.1.2 稀释液 蒸馏水（DH2O）为本实验室自制，阻抗值大于1.5MΩ；生理盐水（NS）注射液为四川科伦药业公司生产；7%小牛血清（7%BSA）用0.01mmol／L 磷酸缓冲夜（PBS）配制；混合血清均取自重庆医科大学附属永川医院体检人员新鲜血清，无明显溶血、肉眼可见黄疸和脂血，其测定值均在参考区间内，收集混匀离心，取上清备用。

1.1.3 仪器 美国强生Vitros350干化学全自动生化分析仪，日本日立7600－020全自动生化分析仪。

1.1.4 试剂 美国强生干化学检测系统采用配套试剂，日立7600－020检测系统采用四川迈克公司试剂。

1.2 方法 分别在强生干化学系统（简称干系统）和日立7600－020湿化学系统（简称湿系统）测定高值标本和混合血清的 Urea、Cr和 UA原始值（Ap），将标本用 DH2O、NS、BSA、混合血清4种稀释液分别进行1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32共5个系列的倍比稀释。在干、湿系统上分别对各稀释样品进行检测，然后将实际测定结果（A1）与通过计算得到的理论值（T）进行偏差计算及相关性分析。

1.3 数据处理 在计算稀释后标本的理论值时，需考虑稀释液的本底值（A0），本底值为稀释液测定3次后的均值。稀释后标本的理论值计算公式如下:

相关性分析:以同一项目各稀释系列的理论值为X，测定值为Y，拟合回归方程。以r≥0.975作为相关性良好的判断标准。所有数据分析均在Excel软件上完成。

2 结 果

2.1 在仪器检测范围内，分别在干、湿系统上测得DH2O、NS、7%BSA、混合血清的本底值见表1。

表1 稀释液中Urea、Cr、UA的本底值

表2 在干、湿检测系统上，各稀释液的回归方程及相关系数

图1 各稀释液在干、湿化学系统Urea测定中的偏差比较图

2.2 4种稀释液在干、湿系统中不同项目检测结果的偏差比较见图1～3。

2.2.1 以美国CLIA′88总允许误差的二分之一为判断标准，Urea、Cr、UA偏差可接受范围分别为:±4.5%、±7.5%、±8.5%。从图1中可见，在湿系统中，Urea用NS、BSA、混合血清稀释均符合要求，而用DH2O在较高稀释倍数（＞1∶16）时不符合要求。在干系统中，Urea用NS和BSA稀释超出了可接受范围，DH2O和混合血清均符合要求，尤以混合血清稀释偏差值最小。本实验还发现Urea用NS和7%BSA稀释后，在干、湿检测系统中的偏差结果差异较大。

2.2.2 从图2可见，湿化学系统中，Cr用DH2O、BSA、混合血清稀释，测定结果均符合要求，而用NS稀释，在较高稀释倍数时就不符合要求。在干化学系统中，Cr除了BSA以外，各稀释液均符合要求。从图3可见在湿化学系统中，UA用DH2O、BSA、混合血清稀释均符合要求，尤以混合血清稀释，其测定结果偏差最小。在较高稀释倍数时，用NS稀释不符合要求。在干化学检测系统中，在较高稀释倍数（≥1∶16）时，UA用NS和BSA稀释超出了可接受范围，用DH2O和混合血清稀释均符合要求，尤以混合血清稀释，测定偏差最小。

图2 各稀释液在干、湿化学系统Cr测定中偏差比较图

2.3 相关性分析 Urea、Cr及UA用不同的稀释液进行系列稀释检测后，分别对理论值与实测值进行相关性分析，以实测值为Y，理论值为X拟合回归方程，Y＝b＋a X。其回归方程和相关系数平方见表2。

图3 各稀释液在干、湿化学系统UA测定中的偏差比较图

3 讨 论

在临床常规生化检测中，经常会遇到超出检测系统线性范围的标本，需要稀释后复测，但究竟选用何种稀释液，目前各实验室做法并不相同［8－9］。同时干、湿系统检测原理不同，干化学的理论基础是Kubelka－Munk理论［10］，湿化学的理论基础是Lamber－Beer定律，它们在检测相同项目能否选用同一种稀释液还有待证明［11］。

本次实验选取用肾功能3项检查的高值标本以4种稀释液稀释后检测发现，在湿化学检测系统上，Urea用NS、BSA及混合血清均符合要求，而用DH2O稀释在较高稀释倍数（＞1∶16）时不符合要求，可能是DH2O对介质影响较大，故测定偏差也较大。对Cr、UA用DH2O、BSA、混合血清均符合要求，而用NS在较高稀释倍数时不符合要求，可能是因为NS的离子强度、pH值与低值血清相近，但无蛋白质和血清成分，故测定结果偏差大。

在干化学检测系统上，Urea、UA用DH2O和混合血清稀释均符合要求，Cr除了BSA以外各稀释液均符合要求。对于肾功能3项检查的高值标本，在湿化学系统中，均可用BSA和混合血清进行稀释；在干化学系统中，均可用DH2O和混合血清进行稀释。而同时能应用于干、湿检测系统的稀释液只有正常人混合血清。可能因为低值血清的蛋白质、离子强度、pH值和其他血清成分基本相近，因此其测定结果偏差最小［12］。

值得一提的是，在美国强生Vitros350干化学全自动生化分析仪Urea的试剂说明书上，写明了如果标本中尿素浓度超出系统的可报告范围，可以用VITROS 7%牛血清清蛋白溶液稀释样本［13］。而在本实验中Urea用7%BSA稀释，其结果超出了可接受范围。造成这种矛盾的原因，有待进一步研究。

在线性验证实验中，根据分析测量范围（AMR）评价要求（a＝1.00±0.05，r≥0.975或者r2≥0.95）［14－15］，在湿化学检测系统中，Urea、Cr及UA，用4种稀释液稀释后AMR评价均符合要求，表明肾功能3项指标在湿化学系统中检测值与理论值相关性良好，符合临床检验的要求。而在干化学检测系统中，Urea以DH2O或混合血清稀释后，AMR评价符合要求，而以NS或BSA均不符合要求；Cr只有NS和混合血清稀释后，AMR评价符合要求，而DH2O和BSA均不符合要求；UA用4种稀释液稀释后AMR评价均符合要求，BSA稀释液在Urea、Cr的检测中均不符合要求，可能与BSA影响了参加反应的酶的活性有关。

由偏差分析和线性评价可以看出，在湿化学检测系统上，即使4种稀释液均符合AMR评价要求，但是偏差分析仍有差异，应引起重视。提示需同时进行偏差分析和线性评价，才能得出科学的结论。

日常工作中，不同的检测系统都会遇到样本的结果超过检测项目的线性范围。本研究发现，在肾功能常规3项检查超限时，同时能应用于干、湿检测系统的稀释液只有健康人混合血清，它是比较理想的稀释液，建议实验室可以建立自己的混合血清标本库，以便用于常规生化检测项目超限标本的稀释。

［1］Hashim IA，Zawawi TH.Wet vsdry chemical analysis of renal stones［J］.Ir J Med Sci，1999，168（2）:114－118.

［2］郑军，赵明.不同稀释液对测定血清淀粉酶和脂肪酶的影响［J］.现代检验医学杂志，2005，17（2）:10－11.

［3］陈燕，赵明，王金行.不同稀释液对CK，CK－MB，LDH 和AST检测结果的影响［J］.中国血液流变学杂志，2003，13（2）:172－173.

［4］胡伟，毕永春，宋景秋，等.不同稀释液对血清中 HBsAg定量测定的影响［J］.东南大学学报:医学版，2010，29（4）:464－466.

［5］Lin MH，Wu MC，Lin J.Variable classifications of glycemic index determined by glucose meters［J］.J Clin Biochem Nutr，2010，47（1）:45－52.

［6］Feng JF，Chen TM，Wen YA，et al.Study of serum argininosuccinate lyase determination for diagnosis of liver diseases［J］.J Clin Lab Anal，2008，22（3）:220－227.

［7］中应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.3版.南京:东南大学出版社，2006:80－82.

［8］刘成忠，肖传宇，侯文华，等.不同稀释液对高值血清肌酸激酶稀释测定的影响［J］.实用医学杂志，2009，25（14）:2361－2362.

［9］黄志基，黄铭颖，岺屹，等.罗氏电化学发光检测系统检测泌乳素的方法学评价及参考范围建立［J］.检验医学，2007，22（6）:623－626.

［10］Barron V，Torrent J.Use of the Kubelka－Munk theory to study the influence of iron oxides on soil colour［J］.J Soil Sci，1986，37（4），499－510.

［11］姚少羽，孙艳虹，高玲，等.Vitros950生化检测系统最大稀释度测定［J］.中国实用医药，2008，3（34）:31－34.

［12］丁忠旗，李永培，盛强.不同稀释液对高浓度HCG测定值的影响［J］.中华核医学杂志，2002，22（1）:39.

［13］喻靓，张煜，左桂兰，等.Vitros 350不同稀释液在线性评估中的比较［J］.检验医学与临床，2008，5（24）:1489－1493.

［14］Yang X，Liu L，Wu M，et al.Wet－chemistry－assisted nanotube－substitution reaction for high－efficiency and bulk－quantity synthesis of boron－and nitrogen－codoped single－walled carbon nanotubes［J］.J Am Chem Soc，2011，133（34）:13216－13219.

［15］Prakash C，Shaffer CL，Nedderman A.Analytical strategies for identifying drug metabolites［J］.Mass Spectrom Rev，2007，26（3）:340－369.