秦海燕，叶 平，白凤相，索志荣

（1.西南科技大学生命科学与工程学院，四川 绵阳 621010；2.西南科技大学分析测试中心，四川 绵阳 621010）

桉叶油是桉树叶油腺细胞分泌的一种植物精油，药理试验表明，桉叶油具有抗菌消炎作用［1］，被广泛用于治疗肺结核，糖尿病，哮喘，也用作消毒剂，抗氧化剂和抗菌剂，尤其在上呼吸道感染疾病的治疗上表现颇佳［2］。关于桉叶油的抑菌活性已有较多研究［3－4］，但以桉叶油为抗菌活性物质制作成固体栓剂用于动物肺炎的恢复治疗未见文献报道。当前，养殖场由于养殖动物密度大，空气流通不畅，上呼吸道感染成为养殖场中极为常见的疾病，其中尤以猪细菌性肺炎居多［5］，养殖户用药种类增多，剂量加大，但用药效果却越来越不理想，导致抗生素滥用日益严峻，间接地危害人类健康。本试验建立了小鼠肺炎模型，将桉叶油制成固体栓剂，利用栓剂中桉叶油自然挥发的特性，通过动物试验研究桉叶油对肺炎小鼠的治疗作用。该试验为解决现代化养殖场中动物上呼吸道感染的预防与治疗以及缓解抗生素滥用的问题提供了简单、便捷、无副作用的给药途径。

1 仪器与材料

超净工作台、恒温生化培养箱、高压蒸汽灭菌锅、接种针、1mL注射器、琼脂、吐温－80、山梨酸钾、琼脂营养粉、75%酒精、乙醚等。桉叶油（医药级），购自郑州蓝宇化工有限公司。保护伞（治疗猪肺炎，编号：31915143217），购自成都福临生物技术公司。实验动物：18～22g雌雄小鼠，Ⅱ级，购自成都市实验动物配送中心。

2 方法

2.1 制备桉叶油固体栓剂 取琼脂4g溶于97 mL蒸馏水，加热至沸腾，维持10min，待混合物冷却至60℃，迅速加入山梨酸钾1g，10mL桉叶油及6mL吐温－80，并沿一个方向不断搅拌使其完全乳化，接着沿玻璃棒倾倒至栓剂模型盒内，待其完全冷却即得桉叶油固体栓剂。

2.2 肺炎病原菌的接种及分离培养 在绵阳某猪场，选取有严重肺炎症状的病猪，宰杀后取其肺部，自来水冲洗至表面无血水，75%酒精表面消毒备用，于超净工作台内无菌操作挑取肺部的脓点接种于培养基，在生化培养箱中37℃恒温培养2d。再挑取单个菌落转接于新的培养基，直至获得纯培养。

2.3 小鼠肺炎模型的建立

2.3.1 肺炎菌悬液的制备 刮取纯培养培养皿内一定数目的特征菌落，置于10mL生理盐水中，摇匀，制作成3种不同浓度的菌悬液，经试验2个／mL菌落为建立小鼠肺炎模型的适合病菌浓度。

2.3.2 穿刺肺叶建立小鼠肺炎模型 取小鼠1只，用乙醚麻醉使其轻度昏迷，仰卧固定；用1mL注射器取b菌液0.05mL，用手触摸小鼠腹部，在小鼠左下腹部找到最后肋骨，从下至上，摸至左侧第3～4根肋骨之间；进针穿过胸腔，刺入肺小心推注。注射完成后，将小鼠置于笼内观察4h，无明显异状，则建模成功。

2.4 桉叶油固体栓剂药效试验 为排除试验过程中偶然误差的影响，本试验共做3批，第1批：取22只小鼠，用2.3.2方法使小鼠感染肺炎病菌。将已成功建立肺炎模型的小鼠随机分成3组，桉叶油组8只，在圈养小鼠笼上放置桉叶油固体栓剂，空白对照组6只，笼上不放置任何东西；保护伞药物对照组8只，在圈养小鼠笼上放置金钟罩固体栓剂，饲养笼分别放于不同的房间。小鼠以专用饲料喂养，自由采食饮水，室温适宜。第2批、第3批小鼠分组及药效试验同第一批。给药方式均为空气给药。

3 结果与讨论

桉叶油固体栓剂药效试验结果与分析 给药后，观察小鼠生理、活动情况并记录，每日2次。小鼠在感染肺炎病菌后的第1、2天均表现精神沉郁，活动量明显下降，食欲不振等，从第3天开始桉叶油组和金钟罩组有部分小鼠出现好转，并在7d之后生理、活动情况正常，但空白对照组死亡情况较为严重。桉叶油组、金钟罩组和空白对照组的小鼠死亡情况见表1。

由表1可知：同一组别不同批次的数据波动平稳，表明本试验重复性较好，且桉叶油组和保护伞组每一批次的小鼠死亡率均低于空白对照组，桉叶油组平均死亡率为58%，空白对照组平均死亡率为89%，桉叶油组与空白对照组差异显著。试验结果证实桉叶油固体栓剂能够自然挥发。与空白对照组相比，桉叶油使肺炎小鼠存活率提高31%。

表1 小鼠死亡情况及死亡率

剖检观察健康小鼠其肺组织颜色淡白、弹性良好；空白对照组死亡小鼠肺组织为淡红色至深红色，可见肺组织出血点并伴有肿胀、弹性差；以桉叶油固体栓剂治疗且2周后未死亡的小鼠肺部呈灰白色、弹性良好，其他无明显病变特征。试验结果证实，桉叶油固体栓剂对肺炎小鼠具有恢复治疗作用。

4 结论

本试验开发了一种新剂型－固体栓剂，并成功将桉叶油加入到固体栓剂中，使桉叶油能够持续、均匀向空气中散发，发挥其抑菌杀菌活性，在成功建立小鼠肺炎模型的基础上，桉叶油以小鼠自然呼吸的方式用于肺炎小鼠的恢复性治疗，小鼠平均存活率提高了31%，显示桉叶油对肺炎小鼠具有恢复治疗作用。将桉叶油制成固体栓剂用于养猪场不仅使用方便，且能匀速持久地向空气中释放出幽雅的清香气味，对大、小型养猪场在预防及治疗猪呼吸道疾病方面具有良好的应用前景。

［1］ 田玉红，张祥民，黄泰松，等.桉叶油的研究进展［J］.食品与发酵工业，2007，33（10）：139－143.

［2］ Aihua Song，Ying Wang，Yanmei Liu.Study on the chemical constituents of the essential oil of the leaves of Eucalyptus globulus Labill from China［J］.Asian Journal of Traditional Medicines，2009，4（4）：134－140.

［3］ 杨致年，曾超，朱宗良，等.植物精油的抗菌性［J］.四川林业科技，2000，21（3）：37－39.

［4］ 黄瑶，田玉红，刘雄民，等.尾叶桉叶精油的成分分析及抑菌效果初探［J］.北方园艺，2010（6）：26－28.

［5］ 白淑民.猪传染性胸膜肺炎病的防治研究进展［J］.甘肃畜牧兽医，1999，5：30－33.