彭清洁 王 冲 胡长敏 陈颖钰 晁 金 闻晓敏 姜 鹏 郭爱珍 ，3，4**

1.华中农业大学动物医学院，武汉 430070；2.华中农业大学动物科技学院，武汉 430070；3.华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，武汉 430070；4.国家肉牛产业技术体系疾病控制功能研究室，武汉 430070；5.武汉科前动物生物制品有限责任公司，武汉 430070；6.武汉海康尔牧业有限公司，武汉 430070；7.武汉市蔡甸区畜牧兽医局，武汉 430100

湖北天门某肉牛养殖场2012年4月初从长春营城子购入一批250kg左右的西杂牛，自购入15d左右肉牛开始发病，主要表现为咳嗽、流鼻涕、拉血便和血尿、呼吸急促、关节肿大、体温升高及精神沉郁。根据牛场主的介绍，结合相关文献报道资料，初步判定是长时间运输，导致犊牛遭受拥挤、饥渴、强噪音等一系列环境因素应激，致使犊牛发病。为确诊病因，本试验对病牛进行剖检取样、致病菌常规分离纯化、病原菌16sRNA鉴定和小鼠攻毒试验。对心脏和肾脏组织样品制作病理切片并观察，可见心肌充血、出血及心肌纤维细胞变性坏死，肾脏淤血、水肿、肾小管变性坏死。

1 材料与方法

1.1 样品

无菌采集病死牛心、肝、脾、肺和肾组织各1份。将采集的各脏器组织块放入10%的福尔马林溶液中固定（固定液的用量是采集组织病料的15倍），备用。

1.2 培养基

李斯特菌（LuriaBertani，LB）液体培养基：称量胰蛋白胨10g、酵母浸出物5g、NaCl10g，溶解于ddH2O中；待其完全溶解后，再用5mol/LNaOH调节pH值至7.0～7.2，定容至1000mL；然后高压蒸汽灭菌20min，室温保存，备用。

胰蛋白胨大豆肉汤（TrypticsoyBroth，TSB）培养基，批号1091999，美国碧迪医疗器械（上海）有限公司生产，按照说明配制，高温灭菌，备用。……