高 茜，管 莹，米其利，李雪梅，缪明明，夭建华

(云南烟草科学研究院,云南 昆明 650106)

中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell，CHO cell)因其生长快、易培养等特性，被广泛应用于生物工程和多种化学物质的毒理学评价[1～3]。对于CHO工程细胞的悬浮培养而言，细胞密度与存活率是影响细胞生长和细胞表达产物的重要因素之一[4，5]；而在毒理学评价实验如中性红细胞毒性实验中，接种的细胞密度对实验定量结果也有较大的影响[6]。因此，在大规模的细胞实验中需要快速准确地进行细胞计数及细胞存活率计算。

传统的血球计数板法易受操作细节影响，精确性得不到保证，并且费时费力。流式细胞仪法由于具有快速定量的特点，近年来在多种生物学实验如细胞周期测定、细胞凋亡检测、细胞分选中都得到应用，但流式细胞仪在细胞计数方面的应用主要是定性地分辨血液细胞中不同标记的细胞比例[7，8]，而对CHO工程细胞的定量细胞计数却未见报道。作者在此应用流式细胞仪进行细胞计数及存活率计算，以期为CHO细胞的蛋白生产及化学品的毒理学评价提供依据。

1 实验

1.1 细胞、试剂与仪器

中国仓鼠卵巢细胞，中国科学院昆明细胞库。

DMEM/F12细胞培养液、PBS、胎牛血清，美国Giboco公司；胰蛋白酶，美国Invitrogen公司；PI(碘化丙啶染色剂)，美国Sigma公司；台盼蓝，上海索来宝公司。

流式细胞仪(Cell Lab Quanta SC High Resolution Flow Cytometry)、流式管，Beckman Coulter公司；CO2培养箱，Thermo公司；二级生物安全柜，Heal Force公司；TS100-F-HMC型倒置显微镜，Nikon公司；细胞培养瓶，美国Corning公司；XS204型分析天平(感量0.0001 g)，Mettler Toledo公司；DT5-5型离心机，北京时代北利离心机有限公司。……