马姝琛，严海东，庄守纲，兰 洋，张瑞青，王 奕

(同济大学附属东方医院肾内科，上海 200120)

随着终末期肾衰竭发病率的升高，临床上腹膜透析的运用越来越多。而随着透析龄的增加，腹膜透析的重要合并症腹膜失超滤的发生率也随之增加。已知腹膜间皮细胞在保持腹膜的正常结构和功能中起主要作用。为了探讨腹膜间皮细胞在腹膜失超滤中的作用，有必要建立一种简便有效的方法获取腹膜间皮细胞，本实验为在体外进行腹膜间皮细胞及腹膜的研究提供了有效手段。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 取材 雄性SD大鼠(体质量:120～160 g，由上海交通大学附属瑞金医院实验动物中心提供)无菌手术取得的大网膜及脾胃韧带。

1.1.2 主要仪器设备 超净台、吸管、离心管、0.22 μm滤膜过滤器、手术剪、眼科剪、镊子、培养皿、25 cm2培养瓶、普通离心机、CO2培养箱、倒置相差显微镜等。

1.1.3 主要试剂 磷酸盐缓冲液(PBS)、DMEM/F12培养液(加入青链霉素各100 μ/ml)、胎牛血清(FCS)、完全培养液(含15%FCS的DMEM/F12培养液)、细胞消化液(0.25% 胰蛋白酶 0.02%EDTA)、免疫荧光抗体(抗细胞角蛋白抗体)、免疫组化染色抗体(抗波形蛋白抗体、抗白细胞CD45抗体、抗第Ⅷ因子相关抗原抗体)

1.2 方法

1.2.1 RPMC的分离培养 无菌取得SD大鼠大网膜及脾胃韧带，置于培养皿内，PBS液洗3次。加入细胞消化液，置于37℃培养箱中消化约10 min。取出后加入等量完全培养液终止消化，吸管吹打约10 min。液体移入10 ml尖底离心管中，1000 r/min，离心5 min。弃上清。加入适量完全培养液重悬细胞，装于25 cm2培养瓶中。放置于37℃、5%CO2培养箱内培养。

1.2.2 RPMC的传代培养 消化下的RPMC置于37℃、5%CO2培养箱内培养，根据细胞贴壁情况24～48 h后予以首次换液。……