蒋备战，王佐林

(1.同济大学口腔医学院牙体牙髓病学教研室，上海 200072;2.同济大学口腔医学院口腔颌面外科教研室，上海 200072)

Versican是细胞外基质中大分子硫酸软骨素蛋白聚糖家族的重要成员。研究表明，它是由一个核心蛋白和连接在其上的12～15条硫酸软骨素多糖链构成，其硫酸软骨素多糖链有4-硫酸软骨素(C4S)和 6-硫酸软骨素(C6S)两类。Versican的硫酸软骨素多糖侧链在不同的组织表达各异，甚至在机体发育的不同阶段也会发生改变［1］。

此前的研究表明，Versican的核心蛋白在小鼠牙齿发育过程中呈特异性的时空表达模式，在牙胚的形态发生、细胞增殖与分化等方面起重要作用［2-4］，但有关其硫酸软骨素多糖侧链在牙胚发育过程中的时空变化尚不清楚，因此本次实验采用免疫组织化学方法，同时检测Versican的核心蛋白及其硫酸软骨素多糖链在小鼠磨牙牙胚发育过程中的时空变化，为更全面地了解Versican在牙胚发育过程中的的作用提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物与材料

实验所用ICR孕鼠由上海生命科学院动物实验中心提供。兔抗鼠多克隆Versican抗体由东京医科齿科大学大学院Tamayuki Shinomura教授惠赠，2B6(识别4-硫酸软骨素)，3B3(识别6-硫酸软骨素)购自Seikagaku公司(日本东京)。SABC免疫组化试剂盒购自美国DAKO公司，AEC显色试剂盒购自日本Nichirei公司，采用日本Olympus光学显微镜和数码图像采集系统采集图片。

1.2 切片制备

以出现阴道栓当日清晨定为胚胎发育的0 d(Embryonic Day 0，E 0 d)。分别取 E 11.5 d、E 12.0 d、E 13.5 d、E 15.0 d、E 16.5 d、E 18.5 d 的ICR孕鼠各三只，乙醚麻醉后断颈处死并取胎鼠头部，PBS清洗干净后用新鲜配制的4%多聚甲醛(pH 7.4)固定24 h，系列乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，矢状或冠状切片，制成5 μm厚的组织切片，4℃下保存备用。……