封 伟，肖姗姗，常闪闪，刘凤权，邵 敏

(南京农业大学植物保护学院/农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室，江苏南京210095)

土壤盐渍化是影响农业生产的一个全球性问题。在世界范围内，灌溉土地的1/3受到盐分胁迫，并且过量的灌溉及降雨的缺乏等一系列因素加剧了盐渍化程度，使土地盐渍化面积逐年增加，已经成为农业可持续发展的制约因素［1］。当前，研究植物盐胁迫分子机制，寻找提高植物耐盐胁迫方法、培育耐盐植株，成为科学研究的一个热点［2］。

OsSsr1基因是一个未知功能基因。本实验室将Harpin蛋白编码基因hrf1基因转入水稻获得的转基因系NJH12具有对干旱等非生物胁迫和生物胁迫的耐性［3］。在NJH12的表达谱中，发现OsSsr1基因表达上调2.8倍，可能与植物的逆境胁迫反应有关(未发表数据)。本研究利用农杆菌介导法将来自水稻Os-Ssr1基因转入烟草，发现OsSsr1的超表达促进了脯氨酸的积累和活性氧清除能力的提高，从而增强了转基因烟草对NaCl的耐受能力。

1 材料与方法

1.1 材料

转基因受体烟草:本氏烟(Nicotiana benthamiana)。

植物双元表达载体pVec8由江苏省农科院杨杰副研究员提供。在pVec8的BamHI和KpnI两个酶切位点间加入水稻OsSsr1基因，构建载体pVOsSsr1(图1)，并将其导入土壤根癌杆菌LBA4404(Agrobacterium tumefaciens LBA4404)，用于转化烟草。

图1 烟草转基因载体pVOsSsr1示意图Fig.1 Schematic diagram of plant expression plasmid pVOsSsr1

1.2 方法

1.2.1 RT－PCR和 PCR－ Southern分析 用Trizol Reagent(Invitrogen)提取烟草总RNA［4］。根据OsSsr1的cDNA 序列设计引物OsSsr1－F2:5＇－ TGTTCATTGCCGGAGTTACCAAGTA －3＇;OsSsr1 －R2:5＇－ TTCAACCACGC CCAAGTCCAT－3＇，用于 RT－ PCR 反应用One Step RNA PCR Kit(Takara，大连)进行RT－ PCR 扩增，反应体积为50 μL，RNA 量1 μg，10 μM 的上下游引物各 2 μL，RNA 酶抑制剂 40 U，10 × Buffer 5 μL，25 mM的MgCl210 μL，10 mM 的 dNTP Mixture 5 μL，MAV 反转录酶5 U。反应条件:50℃，30 min;94℃，2 min;94℃，30 s;48℃，30 s;72℃，1 min;30个循环;延伸72℃，7 min。RT－PCR产物经1%琼脂糖电泳分离后转至尼……