樊垚，任国谱，王力清，綦艳，陈洪涛

(1.中南林业科技大学，长沙 410004；2.广东产品质量监督检验研究院，广东 佛山 528300；3.大连理工大学生命科学与技术学院，辽宁 大连，116024)

0 引 言

维生素D是一种重要的脂溶性维生素，可参与人体内分泌系统对骨骼和无机盐的代谢调节[1]，可由人体皮肤合成，合成量具有波动性[2]。婴幼儿是维生素D缺乏的高危群体，我国婴幼儿乳粉国标中维生素D含量要求为0.25～0.75 μg/100kJ[3-4]，允许的添加形式为维生素D2或维生素D3[5]，生产中为维生素D3[6]。乳粉中维生素D的测定多用液相色谱法[7-9]，样品经皂化后用正、反相色谱测定。过程繁琐，维生素D损失较大，不能反映维生素D实际质量分数。本文改进了婴幼儿乳粉中维生素D测定方法，样品低温皂化后用超高效色谱测定。减少了损失，检测结果良好，为实际生产检验中维生素D的确定和质量分数控制提供了更为有效的方法。

1 实 验

1.1 仪器

Agilent 1290超高效液相色谱仪 (二极管阵列检测器，自动进样器)；电热恒温振荡水槽；Eyela SB-1100旋转蒸发仪；Agilent Eclipse plus.1.8 μm，2.1×100 mm C18反相色谱柱。

1.2 材料

脂肪酶(Candida rugosa Lipase,1 468 U/mg)、无水乙醇、石油醚、无水硫酸钠、氢氧化钾固体、抗坏血酸(分析纯)；维生素D2、维生素D3；甲醇(色谱纯)；10 g/L抗坏血酸-乙醇溶液；浓度为0.01 mol/mL的KOH溶液。

随机选取市售婴幼儿Ⅰ段配方乳粉，标签维生素D3含有量为9.6 μg/100 g。

1.3 方法

1.3.1 维生素D3标准液配制

准确称取10 mg维生素D3，用乙醇溶解并定容至100 mL棕色容量瓶，制备成质量浓度为100 mg/L维生素D3标准储备液(冷冻储藏，保质期3个月)。

1.3.2 样品前期处理

称取10 g乳粉样品(精确到0.1 g)于250 mL具塞三角瓶中。加入1.5 g脂肪酶及20 mL温水充分摇匀溶解，继续加入80 mL抗坏血酸-乙醇溶液及20 mL的KOH溶液混匀，充氮排空气后加塞盖紧，置于恒温振荡器中(37±1)℃振荡5 h(120 r/min)。……