吴向远，丁 冬，宋桂良，付志远

(河南农业大学农学院，河南 郑州 450002)

基因克隆、种子纯度检验、分子标记辅助选择育种等目标的实现都离不开分子标记技术的发展［1～4］，而分子标记的广泛应用要以高效、快速的基因组DNA 提取为前提和保证.在植物基因组DNA 提取方法中，SDS和CTAB［5］是2种经典有效的方法，能够得到大量的高质量DNA，但其提取步骤复杂、耗时。随后产生了用切除的部分胚乳通过NaOH 裂解法提取基因组DNA，该方法虽然能够达到批量样品基因组DNA快速提取且保持种子活力的目的，但得到的DNA 无法长期保存［6］.为解决这一问题，本研究以玉米回交世代群体单粒种子胚乳和单株叶片为材料，以十二烷基肌氨酸钠(SLS)，Tris-HCl，EDTA(乙二胺四乙酸)和NaCl为主要试剂，结合电钻和液氮研磨，分析了其提取效果，并探讨了其在玉米种子纯度检验和分子标记辅助育种应用中的可行性.

1 材料与方法

1.1 试验材料

以杂交种郑单958 及其亲本自交系郑58和昌7-2为种子纯度检验材料，以3000株(综3×许178)× 许178的BC1分离群体为分子标记分析材料.

1.2 试验方法

1.2.1 单粒种子胚乳DNA 提取 选取96 粒干种子，超纯水浸泡20 min.

2)用手术刀片轻轻剥开种皮，剥取微量胚乳放入PCR 板中.

3)加入100μL NaOH 溶液(0.2 mol·L-1，pH值=8.0)，盖上与PCR 板对应的硅胶垫，放入PCR仪中，100℃温育15 min.

4)取出PCR 板后，加入等体积TE 溶液(pH值=2.0)并吸取上清液，冷却10 min.

5)用质量分数0.8%琼脂糖电泳检测或直接用于PCR 扩增;不用时用保鲜膜密封于4℃冰箱保存(不能超过14 d).

1.2.2 单叶片DNA 提取

1)取微量玉米叶片于2.0 mL的离心管中，用系有细绳的小夹子夹住……