沈干，吴京，Gordon Huggins

(1.南京医科大学第二附院东院 整复外科，江苏 南京 210003;2.New England Medical Center，Tufts University，Massachusetts Boston 02115)

肌肉卫星细胞位于骨骼肌纤维的肌细胞膜与基底膜之间，具有自我更新的能力，又被称为肌肉干细胞，在肌肉形成以及肌肉损伤修复中扮演重要作用。慢性酒精中毒可引起肌肉萎缩，甚至引起酒精性心脏病。本研究中作者对慢性酒精中毒过程中乙醇是否通过损害卫星细胞而引起酒精性肌肉萎缩、降低卫星细胞修复损伤肌肉的能力作一探讨。

1 资料和方法

1.1 实验动物及分组

日龄2～3 d Sprage-Dowley(SD)大鼠及FVB成年小鼠来自查尔斯河实验室(美国，波士顿)。(1)体外实验分组:获取大鼠肌肉卫星细胞后实验分实验组(乙醇作用组)及对照组(正常培养液对照组)。卫星细胞生长培养2 d后更换为诱导分化液(DMEM+2%马血清)诱导分化1周。实验组生长培养液及分化液中加入1%的乙醇，共作用9 d。对照组卫星细胞培养不加乙醇。(2)动物实验分组:FVB成年雄性小鼠，体重20～30 g，随机分为两组，每组10只。实验组给予乙醇饮食1个月;对照组给予正常饮食。然后检测肌肉损伤后再生情况。

1.2 试剂及方法

1.2.1 试剂 胰蛋白酶 (Sigma)，Ⅱ型胶原酶(美国，Wort-hington)，F10培养液、胎牛血清 (FBS)、DMEM培养液、马血清均为Gibco公司产品。ADS缓冲液由Gorden Huggins实验室提供。80 μm尼龙网(Becton，Dickinson and Company，美国)，10T1/2(C3H)细胞系由Gorden Huggins实验室提供，myoD质粒由 Gorden Huggins实验室提供，鼠乙醇饲料(Dyets#710260，美国)，鼠对照正常饲料(Dyets，#710027，美国)。

1.2.2 肌肉卫星细胞获取 将SD大鼠 断颈处死，以75%酒精消毒皮肤，取后腿肌肉，冷PBS冲洗数次，以锐利眼科剪反复剪切肌肉组织，直至肌肉呈肉糜状。加入终浓度为100 U·ml－1Ⅱ型……