尹磊淼,魏颖,王宇,冉君,刘晓燕,徐玉东,杨永清



Tricine电泳优化方法在针灸效应小分子蛋白检测中的应用

尹磊淼1,魏颖2,王宇1,冉君2,刘晓燕2,徐玉东1,杨永清2

(1.上海市针灸经络研究所,上海 200030;2.上海中医药大学,上海 201203)

改进一种适合分离、鉴定针灸效应小分子蛋白的Tricine-SDS-PAGE电泳体系。研究调整分离胶中聚丙烯酰胺浓度和凝胶交联度并加入适量甘油,从而优化Tricine电泳系统。与常规Glycine-SDS-PAGE电泳系统比较,分离胶聚丙烯酰胺浓度为l6.8%、交联度为5.8%、含10.4%甘油的Tricine-SDS-PAGE电泳明显减少10 kD分子量蛋白的弥散,成功分离了分子量为11.0 kD的S100A8和11.8 kD的S100A11等两个针刺抗哮喘小分子蛋白。优化的Tricine-SDS-PAGE电泳系统可有效分离针灸效应小分子蛋白。

针灸效应;物质基础研究;Tricine电泳;小分子蛋白

作为生命科学的分支之一,针灸学和分子生物学、神经生物学、系统生物学等学科相互交叉,相互推动,产生了针灸效应物质基础研究等一系列新的研究方向和领域[1,2]。针灸效应物质基础研究立足于生命现象的本质,研究不同针灸效应的响应基因和应答蛋白,阐释相应的针灸效应生物学机制。这对保持我国在针灸研究领域的国际领先地位,率先在针灸研究领域拥有原创性的自主知识产权具有重要的战略意义[3]。针灸效应物质基础研究常用技术手段有高效液相色谱[4],蛋白质双向电泳技术,基因芯片、基因表达连续分析(serial analysis of gene expression,SAGE)技术[5]等。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)因操作简便,测定快速,重复性好,上样量少等特点在针刺效应蛋白质的分离、分析、纯化、鉴定等实验中具有广泛的用途。……