汤 强 方 玲 章玉萍

(1芜湖职业技术学院，安徽芜湖 241003;2安徽省农业科学院蚕桑研究所，安徽合肥 230061)

家蚕G蛋白α亚基基因BmGα73B原核表达及其表达条件优化

汤 强1方 玲1章玉萍2

(1芜湖职业技术学院，安徽芜湖 241003;2安徽省农业科学院蚕桑研究所，安徽合肥 230061)

通过RT-PCR技术从家蚕中扩增出G蛋白α亚基基因BmGα73B的cDNA，克隆至原核表达载体pET-41b(+)中，所获得的重组质粒经酶切鉴定后，将其转化至E coli BL21诱导表达，用SDS-PAGE与Western blot对表达产物进行鉴定。结果表明，通过RT-PCR扩增获得长度为1 158 bp的蛋白基因，诱导表达重组质粒pET-41b(+)-Gα73B，经SDS-PAGE检测，IPTGr的终浓度为1 mmol/L时，诱导4 h时蛋白表达量最高，出现分子质量约为73 kD的目的蛋白带，与蛋白的理论值相符。经Western blot检测，表达产物可与GST发生特异性反应。

G蛋白α亚基;BmGα73B;RT-PCR;克隆;原核表达

异三聚体G蛋白(heterotrimeric GTP-binding protein，简称G蛋白)家族在昆虫多种特异的细胞信号传导中起着十分重要的作用，如激素、神经递质、光、药物等特异作用信息都是通过细胞膜受体与G蛋白偶联，从而传递至细胞内，产生各式各样的生理反应［1－2］。G 蛋白是由 α、β和 γ3个亚基组成，在自然状态下，β与γ亚基始终以二聚体的形态结合在一起，并通过γ亚基定位于细胞质膜上，只有在变性条件下才能分开。根据G蛋白的结构、氨基酸序列及其进化相似性和功能等可将其分为Gs、Gi、Gq和G12这4个家族［3］。其调节的下游效应器有腺苷酸环化酶，cGMP磷酸二脂酶，磷酸肌醇3－激酶，PI-PLCP，Na+/H+泵，TUBBY 转录因子，离子通道等［4］。不同的G蛋白能特异地将受体和与之相适应的效应酶偶联起来。

家蚕(Bombyx mori)作为重要的经济昆虫，也是继果蝇(Drosophila melanogaster)之后又一个适用于现代生命科学研究的模式昆虫。……