张如华,徐双兵,武远众,康铁邦

(华南肿瘤学国家重点实验室∥中山大学肿瘤防治中心实验研究部,广东 广州 510060)

细胞周期是一个复杂的过程，其精确调控是维持基因组稳定性以及细胞正常功能的必要条件[1]。已有研究表明很多种调节蛋白参与调控细胞周期的进程，包括cyclins(细胞周期素)，CDKs(Cyclin-dependent kinase 周期素依赖性激酶)以及 CDK 抑制分子[2,3]。为确保细胞周期正常运行，细胞内自发形成了许多的调控机制。细胞周期检测点就是其中重要的一种调控机制，如果其激活缺陷就会导致细胞周期的紊乱，从而有可能导致肿瘤的发生[4]。

hSSB1是最近发现的一种单链DNA结合蛋白，是参与调控细胞周期检测点的一个重要分子[5]。缺失hSSB1的细胞表现为细胞检测点的激活缺陷，放射敏感性增加以及基因组的不稳定性[5]。本课题组前期研究结果发现hSSB1可以和p21相互作用从而调控细胞周期检测点的运行，而且hSSB1在人类肝癌组织中呈高表达[6]，但其高表达后对肿瘤生物学行为的影响目前并不清楚。在本研究中，拟构建hSSB1高表达的逆转录病毒载体pBABE-hSSB1，并进行高表达稳定株的筛选，为进一步研究hSSB1的功能奠定基础。

1 材料和方法

1.1 材料和试剂

HeLa,HepG2和HEK293T细胞由中山大学肿瘤防治中心保存。pBABE-puro逆转录病毒载体(含有嘌呤霉素抗性基因)为中山大学公共卫生学院陈雯教授馈赠。PIK病毒包装质粒由中山大学肿瘤防治中心曾木圣教授馈赠。BamH I、SalI内切酶以及逆转录试剂盒均为MBI Fermentas公司产品,T4 DNA Ligase购自Takara公司，质粒小提试剂盒和切胶回收试剂盒均购自Qiagen公司，2×Taq PCR MasterMix 购自北京天根公司。……