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(湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208)

竹沥为禾本科刚竹属植物淡竹(PhyllostachysnigroMunrovar.hcninis(Mif)StapfetRendle)的茎用火烤灼而流出的液汁。其性味甘苦，寒。入心、胃经，具有清热化痰，镇惊利窍之功能。临床上主要用于治脑卒中痰迷，肺热痰壅，惊风，癫痫，壮热烦渴，子烦,破伤风[1]。竹子品种繁多，分布广泛，可见不同产地、不同品种竹子所制竹沥质量、药效不同。本实验所选竹子产地均为竹源较丰富地区，品种也是较常见竹种，采用水提取法制取竹沥[2]，通过建立其HPLC指纹图谱，比较其差异,探索其基本成分规律，并鉴别真伪，从而为中药材种植采收规范和打击假冒伪劣产品奠定基础。现将实验结果，报道如下。

1 仪器与试药

AR1140电子分析天平(奥豪斯国际贸易有限公司)；Waters高效液相色谱仪(包括Waters1525泵，Waters2410检测器Refractive Index Detecter,Breeze工作站)；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；RE-52C旋转蒸发器(巩义市英峪予华仪器厂)；800型离心沉淀器(长沙市科伟仪器厂);KDM型调温电热套(山东鄄城华鲁电热仪器有限公司)。

愈创木酚对照品(供含量测定用，批号:111510-200202；购于中国药品生物制品检定所)；乙腈为色谱纯，其他为分析纯；水为2次重蒸馏水。

实验中所用样品种类及产地见表1。样品经湖南中医药大学药学院生药教研室周日宝教授鉴定，均为禾本科刚竹属植物竹子的新鲜杆茎，见表1。

表1 样品产地及品种

2 实验方法

2.1 色谱条件 色谱柱：Dikma DiamonsilTMC18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温为30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；检测波长：254 nm；流动相梯度如表2，记录时间为80 min。

表2 流动相梯度(A：乙腈，B：0.1%磷酸水溶液)

2.2 样品溶液的制备 称取竹子粉末50 g，加7倍量水浸泡1 h后，武火煮沸,沸后用文火煮50 min，滤过，滤渣加5倍量水，武火煮沸，沸后用文火煮40 min，滤过,合并滤液，减压浓缩(70 ℃水温)，定容至100 mL量瓶中，即得[2]。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取竹沥样品溶液20 mL，放置冰箱24 h，取出滤过，滤液加水定容于25 mL量瓶中，取10 mL，离心15 min(转速4 000 r/min)，上清液过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液备用[3]。

2.4 伪品供试品溶液的制备 毛竹制伪品：将毛竹点燃插入水中，再按2.3处理制成。淡竹制伪品：将淡竹点燃插入水中，再按2.3处理制成。

2.5 检测波长的确定 先后在200、210、220、254、275、285 nm处检测，结果表明，只有在 254 nm处检测，峰数较多，基线较平稳，故选择254 nm作为指纹图谱的检测波长[3]。

2.6 方法学考察

2.6.1 精密度实验 取样品1的供试品溶液，连续进样6次，测定高效液相色谱图，结果 6次进样各共有峰相对保留时间及相对峰面积的相对标准偏差(RSD)均小于5%，表明仪器精密度良好[3]。

2.6.2 稳定性实验 取样品1的供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12 h进样，测定高效液相色谱图，结果 6次进样各共有峰相对保留时间及相对峰面积的相对标准偏差(RSD)均小于5%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定[3]。

2.6.3 重复性实验 取样品1溶液6分，精密量取，按文中3.3项制备供试品溶液，分别进样，测定高效液相色谱图，结果 6次进样各共有峰相对保留时间及相对峰面积的相对标准偏差(RSD)均<5%，表明此分析方法的重复性较好[3]。

3 实验结果

3.1 将不同产地、相同品种的样品HPLC图谱导入国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”，对照谱生成方法采用中位数，时间窗宽度0.20，进行自动匹配，所得见图1～图4。

长沙(S1)、湘潭(S2)/淡竹/(29个共有峰，相似度0.796)

广西(S1)、江西(S2)、长沙(S3)/水竹/(25个共有峰)

河南(S1)、广西(S2)/甜竹/(28个共有峰，相似度0.610)

河南(S1)、重庆(S2)/苦竹/(28个共有峰，相似度0.902)

3.2 将相同产地、不同品种的样品HPLC图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，所得图谱见图5～图8。

3.3 真、伪竹沥指纹图谱 见图9。

长沙/斑竹(S1)、淡竹(S2)、水竹(S3)/(20个共有峰)

湘潭/丛竹(S1)、淡竹(S2)/(26个共有峰，相似度0.881)

广西/水竹(S1)、甜竹(S2)/(19个共有峰，相似度0.426)

河南/苦竹(S1)、甜竹(S2)/(29个共有峰，相似度0.824)

长沙淡竹(S3)与伪淡竹(S1)、伪毛竹(S2)

4 结论

淡竹沥中主要含有氨基酸、酚类成分、无机元素、有机酸4大类成分[4]，无机元素和有机酸为植物中普遍含有的成分。根据文献[5-6]报道，淡竹沥中的氨基酸及愈创木酚被认为是清热化痰作用的有效成分。天然酚性化合物具有广泛的生理作用，一般简单的酚性化合物如愈创木酚多具有抗感染作用，淡竹沥中的愈创木酚有减轻炎症，减少呼吸道分泌物的作用。基于竹沥祛痰的主要作用，故选择愈创木酚作为有效成分进行含量测定。

竹的种类很多,共计500余种，大多可供庭院观赏、经济实用，竹子药用也早有记载。根据历代文献记载鲜竹沥主要是以淡竹为原料制备而得，梁代陶宏景认为也可采用苦竹和慈竹为原料[1]。现在用来制备鲜竹沥的竹种不仅仅局限于淡竹一种，因此本实验选用常见的有代表性的7种竹子为原料进行实验。

通过实验研究发现：不同产地的同一品种竹沥的指纹图谱存在较大差异；相同产地的不同品种竹沥的指纹图谱存在较大差异；由于不同产地不同品种竹子所制竹沥指纹图谱存在较大差异，可以肯定其药效也不同。在竹沥的生产加工过程中，应规范竹子的产地、品种。

与竹沥比较，伪竹沥几乎不具有共有峰且含量极低。利用指纹图谱可对伪竹沥进行真伪鉴别。

[1]梁·陶弘景.本草经集注[M].北京:群联出版社影印,1955.

[2]李红,刘党生,将孟良,等.竹沥水提取方法的优选研究[J].中药材,2009,32(4):620-622.

[3]周孟辉,李红,将孟良,等.不同采收期水竹所制竹沥的HPLC指纹图谱研究[J].湖南中医药大学学报,2009,29(3):33-36.

[4]欧敏锐,李忠琴,周训胜,等.福建产竹醋液(竹沥)的组分分析[J].福建大学学报,2003,31(3)：360-363.

[5]殷玉生,丁青龙.竹沥止咳成分探讨及临床疗效观察[J].中国医院药学杂志,1988(11):519-521.

[6]殷玉生,丁青龙.竹沥浅淡[J].江西中医药,1987(4):47.