邓雨修，王东东，潘永飞，周庆丰，苏润环，李春梅

（广东温氏集团研究院，广东 新兴 527400）

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）诱发的急性接触性传染病，主要引起妊娠母猪的繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状。PRRS的病原具有遗传多样性，在世界上流行广，防控难度大，所造成的经济损失严重。猪繁殖与呼吸综合征病毒属于RNA病毒,利用反向遗传学技术可以为其致病机制研究和新型疫苗的研制提供有效的技术平台。以下主要从反向遗传学技术在病毒基因功能研究中的应用及减毒活疫苗株拯救等方面进行阐述。

1 反向遗传技术在PRRS病毒研究中的应用

PRRSV作为正链RNA病毒家族的一员，其基因组同时也作为mRNA，并具有感染性。直接将编码病毒基因组的cDNA克隆转染，或将体外由cDNA克隆转录出的病毒RNA转染易感细胞就可以获得完整的有感染性的病毒。因此反向遗传学在PRRSV的研究中应用较广，已渗透到了PRRSV研究的各个方面。

1.1 反向遗传技术在PRRSV基因组结构和功能研究中的应用 随着拯救技术的成熟，越来越多的研究者开始利用反向遗传技术通过缺失、突变等操作对PRRSV的基因功能进行研究。Ansari IH等通过对GP5第34、44位和51位几个糖基化位点进行突变，然后拯救后发现，第44位突变后不能得到活病毒，而第34和51位突变后的拯救病毒滴度要低于母病毒。接种猪后发现，突变后的病毒可以产生较高的中和抗体。Han J等通过对nsp2进行一系列的缺失操作后发现，nsp2的13～35位氨基酸是病毒复制的非必需区，高变区（324～813）可以承受100个或200个氨基酸的缺失，但是在324～726位不能全部缺失，最多容忍400个氨基酸的缺失。……