范韵敏

来自链霉菌属的阿魏酸酯酶的分离纯化、理化性质

范韵敏

（漳州职业技术学院, 福建 漳州 363000）

通过盐析透析、离子层析、疏水层析，对链霉菌属发酵液中的阿魏酸酯酶（FAE）进行分离纯化，并进行酶学性质研究。得出的阿魏酸酯酶的纯化倍数为2.67，回收率为55.8%，酶分子约为30 kDa。其最适反应pH约为6.0，最适温度约为50°C，金属离子Cu2+和Zn2+对阿魏酸酯酶酶活力均有明显的抑制作用，而Mg2+、Fe2+、Ca2+、Na+和Mn2+对酶的活性均有一定的促进作用。

阿魏酸酯酶；纯化；性质

阿魏酸酯酶[1]（E.C.3.1.1.73，Ferulie acid esterases，FAE），属于羧酸酯酶类，是一种典型的肉桂酸酯酶。它可破坏阿魏酸与多糖相连的酯键，从植物细胞壁中释放阿魏酸，让余下的多糖主链易被降解，有效提高了含有大量木质纤维素和阿魏酸的副产品的营养价值[2]。阿魏酸酯酶的活性是在橄榄产色链霉菌和裂褐菌的发酵液中第一次被发现[3]。此后，几种微生物被证实能分泌阿魏酸酯酶，以真菌为多，细菌与放线菌较少。但不同微生物分泌的阿魏酸酯酶在氨基酸序列、理化性质和催化功能上有所不同[4,5]。

研究对一链霉菌属发酵的阿魏酸酯酶的分离纯化，考察了其最适反应pH、最适温度，以及金属离子对其的影响，为木质纤维综合利用提供了前期的研究参考。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1主要试剂和仪器

反式阿魏酸标准品，EDTA，阿魏酸甲酯(MFA)，硫酸铵，过硫酸铵，低分子量SDS蛋白Marker，考马斯亮蓝，DEAE-Sepharose Fast Flow层析介质，Phenyl-Sepharose 6 Fast Flow层析介质， AKTA Prime蛋白质纯化仪，蛋白电泳仪， Agilent 1100高效液相色谱仪，Thermo EC120小型垂直电泳系统，ODS-C18色谱柱(5μm，4.6 mm×250 mm)，Gis-2008凝胶成像系统。……