杜 爽，张 岩，王 轩

（天津市种子管理站，天津 300061）

玉米种子纯度（是指品种在特征特性方面典型一致的程度）是检查玉米种子质量的重要指标之一，鉴别种子的纯度对玉米生产具有决定性作用。目前，检验方法主要包括田间检验、室内检验和田间种植检验。

随着我国玉米种子市场的快速发展，传统检验手段已存在很大局限性，所以，急需我们建立一套简便、快速、经济和准确的种子纯度检测技术体系。

DNA分子标记技术是以DNA碱基序列的差异进行分析对比，从而鉴别不同品种。其检测对象是种子DNA的片段（基因），并没有器官的特异性，且不受外部环境的影响，所以，有较高的准确性、稳定性和重复性。目前，在玉米品种鉴定中应用的有RFLP技术、RAPD技术、AFLP技术和SSR技术等。

1 RFLP技术

限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism，简称 RFLP）指一个品种的DNA片段长度多态性。它是在1974年由Grodzicker等创立一种以DNA-DNA杂交为基础最早发展起来的第一代遗传标记。其原理是用限制性内切酶酶切不同品种的DNA，由于DNA经限制性内切酶消化产生了长度不等、分子质量大小不同的片段，通过琼脂凝胶电泳分离大小不同的DNA片段，转移凝胶中的DNA到尼龙膜或硝酸纤维素膜上，用放射性同位素或生物素标记的探针进行Southern杂交，经放射显影后，可观察待鉴定品种的RFLP指纹，经与标准品种RFLP指纹图谱比较后，即可对此品种进行纯度分析。它反映了DNA序列中核苷酸排列顺序的差异，RFLP标记的多态性来源于基因组限制性酶切位点的突变及相邻位点间DNA结构重排 （包括缺失、重复、异位和插入）。……