黄慧岳，谢达平

（湖南农业大学生物科学与技术学院，湖南 长沙 410128）

氮是农作物生长所必须的营养元素[1]。在农业生产中，氮被视为衡量土壤养分状况乃至土壤肥力的一个重要指标[2]。作物每年都要从土壤中带走大量的氮素，为补充土壤氮素的损失，工业化学氮肥至今仍然是人类向土壤补给氮素的重要来源。而工业氮肥的使用造成了土壤酸化和环境污染等一系列问题，阻碍了农业的可持续发展[3-5]。利用固氮微生物和联合固氮微生物等生物固氮来提高土壤无机氮含量是土壤氮肥补充的有效途径[6]。利用固氮微生物提高农作物产量的研究国内报道较多，其中有选用内生固氮菌的，也有选用自生固氮或联合固氮微生物的。笔者拟从土壤分离出的自生固氮菌为试验材料，测定其固氮能力和对水稻苗生长的影响，并选择固氮力较强的菌株，施用于土壤，检测其在土壤中的变化趋势和对土壤氮含量的影响，以期寻找到有应用价值的固氮微生物。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌株 试验菌株为自生固氮菌，分离出该菌株的4份土壤来自湖南农业大学，采集地点分别为艺苑、实验基地、二食碗池周边、八教垃圾收集处周边。

1.1.2 培养基 Ashby无氮培养基：甘露醇1%，KH2PO40.02%，MgSO4·7H2O 0.02%，NaCl 0.02%，CaSO4·2H2O 0.01%，CaCO30.5%。固体培养基另加琼脂8%。

1.1.3 仪 器 恒温摇床、超净工作台、试管、培养皿、移液管、烧杯、恒温培养箱、三角瓶、量筒、蒸汽电热灭菌锅、吸管、电子天平、pH计、紫外分光光度计、涂布棒、酒精灯、移液枪、凯氏定氮仪等。

1.2 方法

1.2.1 自生固氮菌的初筛及形态观察 从湖南农业大学4个不同区域采取土壤样品，制备土壤菌悬液并取上清液在试管中作梯度稀释。……