张 敏，吴英详，阮颖慧，里 南，林光美

(福建农林大学1.食品科学学院 ，2.作物科学学院，福建 福州350002)

高效液相色谱(high performance liquid chromatography，HPLC)是采用颗粒十分细的高效固定相并采用高压泵输送流动相的一种液相色谱法。20世纪60年代后期，由于新型柱填料高压输液泵和高灵敏度检测器的出现，使高效液相色谱快速发展起来［1］。高效液相色谱作为物质分离的重要工具，在各个方面都取得了很大的发展。近年来，为了使物质的检测更加准确方便，出现了各种HPLC串联技术，如液－质联用，以及与梯度洗脱、柱切换技术等先进技术的配合，使得HPLC在药物、食品、环境分析等领域发挥强大的优势，得到广泛的应用［2］。特别是在中药分析中发挥很大作用，中药成分繁多，各种成分的性质遍布所有极性段，HPLC可实现多成分分离分析，进行中药鉴别，建立指纹图谱等［3］。因此，HPLC得到人们的广泛青睐。

雷公藤为卫矛科植物雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.)的根、叶及花，是我国传统的一味中药［4］，其成分复杂，不同产地、来源或同一产地不同生长年限雷公藤药材中有效成分的含量差异较大。临床研究表明雷公藤是一味目前为止中药、西药难以取代的用于类风湿性关节炎、红斑狼疮等自身免疫性疾病治疗的药物，但有效成分也是其毒性成分且阈值相近。所以利用高效、方便的提取方法和准确灵敏的测定有效成分含量的方法，可为选育雷公藤优质种苗、以及何时采收药材提供依据，也可为雷公藤的复方制剂生产建立药材检测的可控标准，还可为雷公藤制剂临床用药提供标准，实现雷公藤用药的多指标质量控制。

1 HPLC在雷公藤良种选育上的应用

随着雷公藤的不断开发利用，野生资源已经匮乏，因此利用便捷、高效、可靠的技术手段筛选有效成分含量高的雷公藤种源具有重要的意义。传统上筛选雷公藤一般考察其茎、叶等的长势以判断雷公藤药材的优良，此种方法较为简易，但效果不太准确。目前，很多学者已将HPLC测定方法应用到良种选育上并获得很好的效果。黄文华(2005)利用HPLC测定了全国主要分布区25个群体91个个体的木质部和韧皮部中的雷公藤甲素含量并分析差异性，筛选出3个居群中甲素含量高的个体［5］，应用HPLC－DVD技术，通过测定不同产地的22个雷公藤样品，建立HPLC图谱，确定样品的色谱指纹图谱的20个共有峰，考察雷公藤药材的质量差异［6］。斯金平(2006)等建立HPLC测定方法，研究雷公藤药材中雷公藤甲素质量分数的变异规律，为雷公藤药材人工栽培遗传改良、采收加工、质量评价提供理论依据［7］。陈丽雅(2010)利用HPLC技术建立雷公藤药材主要化学成分特征的指纹图谱，分析4个不同种源雷公藤药材质量差异，利用HPLC指纹图谱选育雷公藤优良种源［8］。综上表明，HPLC可以很好的应用于雷公藤良种选育，能为评价雷公藤药材质量和寻找雷公藤的优质种源奠定基础。

2 HPLC在雷公藤药材成分分析的应用

雷公藤化学成分复杂，有些微量成分具有很强的生物活性，但其有效成分至今未能得到完全、彻底的研究。到目前为止已从该属植物中共分离鉴定了140种以上的天然化合物，主要分为倍半萜类(包括倍半萜生物碱)、二萜类、三萜类、少量木质素和其他化合物，其中共分离到74种倍半萜化合物，24种二萜类化合物，19种三萜类化合物［9］。如何将现代化的分离手段与传统的提取方法相结合，进行雷公藤有效成分的分离分析至关重要，而HPLC可实现多成分分离分析，该技术也得到人们的认同，若其与高效的提取方法相结合，将会推进雷公藤有效成分的研究及活性单体的制备。李红茹利用超临界流体提取雷公藤有效成分。并表明雷公藤有效成分含量的测定多采用高效液相色谱法［10］。孙乙铭(2009)等用高效液相色谱法测定雷公藤中雷公藤甲素的含量，研究雷公藤植株不同部位及不同采收年限雷公藤根雷公藤甲素含量的差异情况，结果呈良好的线性关系，回收率为95.90%，RSD=3.49%(n=6)［11］;陈岳祥(2009)等建立高效液相色谱法测定广西产粉背雷公藤中不同部位雷公藤甲素的含量方法［12］。结果均表明HPLC测定法简便、准确、灵敏、重复性良好，适用于雷公藤甲素的含量测定。

张玉(2008)采用HPLC仪器检测雷公藤药材提取物中雷公藤甲素和雷公藤红素的含量差异，比较提取方法的提取率［13］;库尔班江(2008)等建立雷公藤药材中雷公藤红素的HPLC测定方法，均表明HPLC方法可靠［14］。张聪聪(2009)等利用HPLC法对雷公藤甲素等主要成分进行测定，其结果在一定范围内均呈良好的线性关系，平均加样回收率在98.81 ～99.84 范围内，RSD≤1.42(n=6)［15］。李蜜(2010)等运用HPLC测定雷公藤药材中雷公藤内酯醇含量。结果表明雷公藤内酯醇与其他成分分离效果良好，平均回收率为 98.17%［16］。陈兰(2010)建立了高效液相色谱法测定雷公藤红素的方法;研究表明该方法具有操作简便，准确，回收率好，精密度高，重现性好，分析快速的优点，可作为雷公藤药材中雷公藤红素的定量分析和质量控制方法［17］。此外，周雯(2007)以高效液相色谱法测定雷公藤甲素、毒性成分雷公藤红素和总生物碱的含量。建立雷公藤有效成分色谱指纹图谱，并以高效液相－质谱联用技术鉴定了色谱指纹图谱中27个共有峰中的21个共有峰所对应的化学成分的结构［18］。欧阳小琨(2007)建立了HPLC同时测定雷公藤提取物中雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤定碱以及雷公藤次碱的分析方法［19］。结果表明HPLC法稳定可靠，重现性较好，分离效能高，方法可实现多成分的分析。

3 HPLC在雷公藤制剂质量控制的应用

长期的临床研究表明雷公藤对抗肿瘤、抑制免疫、抗炎、抗生育、抗艾滋病毒等效果明显，有广阔的应用发展前景。雷公藤制剂常见的类型有片剂、滴丸、微囊剂等［20］，而其自身的药理特性又从某种程度上制约着雷公藤药物的发展，因此，除了对雷公藤药物构－效关系进行研究从而保证雷公藤药物的用药安全外，对药物的量－效关系进行把关是比较有效且简便的途径。我国部颁标准也规定了雷公藤药物中雷公藤甲素和雷公藤红素的检测方法和含量控制。许多研究也表明HPLC可以作为雷公藤制剂质量控制的测定方法。夏焱(2005)对雷公藤药物中的重要有效成分－雷公藤甲素和主要毒性成分－雷公藤红素的含量测定方法进行了研究，建立甲素和红素的HPLC含量测定方法，初步确定了HPLCELSD结合紫外检测的方式对该类药物进行质量控制，表明HPLC可作为雷公藤类药材及其制剂中这两种成分的定量分析及药物质量控制的方法［21］;阙慧卿(2005)等采用高效液相色谱(HPLC)法测定雷公藤多苷片中内酯甲的含量，并与该药品采用薄层扫描法(TLC)所制定的质量标准进行比较;结果表明HPLC法更准确，更可靠［22］。刘法千(2007)等应用HPLC法测定雷公藤多苷中雷公藤内酯甲的含量。结果表明该方法简便、准确、重复性好，可用于雷公藤多苷的质量控制［23］。库尔班江(2008)等采用外标法建立雷公藤制剂中雷公藤红素的HPLC测定方法，表明HPLC可作为雷公藤制剂中雷公藤红素的定量分析和质量控制方法［24］。吴霞(2009)等建立雷公藤制剂中雷公藤红素含量的HPLC测定方法，并对市售雷公藤制剂样品中雷公藤红素含量进行比较研究。表明利用适当的检测手段对其进行质量监控和制定合理的质量控制标准势在必行［25］。除此之外，罗晓玲(2007)研究建立了雷公藤不同部位及制剂中5种萜类化合物的HPLC－ELSD分析方法。为雷公藤及其制剂的质量控制提供了较全面的通用分析方法［26］。

4 展望

随着雷公藤研究的不断深入以及其良好的药效和广泛的应用，雷公藤的需求量越来越大，而且“雷公藤GAP关键技术及新药研发”获得了“十一五”及“十二五”国家科技支撑计划项目资助，足见雷公藤药材的重要地位，但是经过多年开发雷公藤资源已经大幅度减少，且雷公藤药物的质量标准及用药安全一直是人们所关注的核心问题。所以必须通过科学手段从雷公藤种源筛选、新剂型研发、有效成分结构改造、制剂质量控制等系统得保障雷公藤用药的安全。研究表明，高效液相色谱可以应用于雷公藤的化学成分的分离分析，且方法简便、准确、重复性好，若其能与一些更精确的检测仪器结合，使成分的检测更加准确方便，将会推进雷公藤产业的发展。

［1］仁 斌.高效液相色谱在医药研究中的应用［M］.上海:上海科学技术出版社，2003:1.

［2］孟兆玲.高效液相色谱－质谱联用技术的应用进展［J］.化学分析计量.2006，15(6):6.

［3］王 昕.高效液相色谱研究进展［J］.光明中医，2011，26(1):56－57.

［4］高晓英，陈政光.中药雷公藤的研究进展［J］.山东生物医学工程2001，20(1):46－48.

［5］黄文华，郭宝林，斯金平.雷公藤药材HPLC指纹图谱研究［C］//中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会.第五届全国雷公藤学术会议论文汇编.福建泰宁:中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会，2008:125－132.

［6］黄文华，郭宝林，斯金平.雷公藤属3种植物不同群体和个体中雷公藤甲素的研究［J］.中草药，2005，(07):1065－1068.

［7］陈丽雅.雷公藤优良种源选择［D］.浙江农林大学，2010.

［8］斯金平，黄文华，郭宝林.雷公藤药材中雷公藤甲素变异规律［J］.中国中药杂志，2006，(24):2026－2030.

［9］夏 焱，段宏泉，张铁军.雷公藤属药用植物的研究进展［J］.中草药，2005，36:7.

［10］李红茹.超临界流体在中药雷公藤制剂中的应用及其溶解度的理论研究［D］.化工学院，2008.

［11］孙乙铭，徐建中，王志安.HPLC测定不同采收年限雷公藤根及不同部位雷公藤甲素含量［J］.中国现代应用药学，2009，(11):904－906.

［12］陈岳祥，乔 艳，乔化民.HPLC法测定粉背雷公藤中雷公藤甲素的含量［J］.药学实践杂志，2009，(02):134－136.

［13］张 玉.雷公藤中有效成分的提取分离与微球制剂的制备［D］.天津大学，2008.

［14］库尔班江，张 焱.雷公藤药材中雷公藤红素的高效液相色谱法测定［J］.西北药学杂志，2008，(02):82－84.

［15］张聪聪，黄建明，俞媚华.HPLC法测定雷公藤提取物中雷公藤甲素两种生物碱的含量［J］.复旦学报，2009，36(3):333－336.

［16］李 蜜，刘苏瑶.HPLC法检测雷公藤药材中雷公藤内酯醇的含量［J］.中国中医药咨讯，2010，2(10):262－263.

［17］陈 兰.雷公藤红素提取、纯化和测定研究［D］.中南大学，2010.

［18］周 雯.雷公藤超临界萃取有效部位质量控制研究［D］.天津医科大学，2007.

［19］欧阳小琨.雷公藤有效成分分离研究［D］.浙江大学，2007.

［20］任 荣，李正翔，李彬.雷公藤有效成分及其制剂的研究进展［J］.中国医院药学杂志，2005，25(11):1068－1069.

［21］夏 焱.雷公藤有效成分的含量测定及色谱指纹图谱研究［D］.天津:天津大学，2005.

［22］阙慧卿，邓思珊，林 绥.雷公藤内酯甲含量测定方法的改进［J］.中药材，2005(2):144－145.

［23］刘法千，鲍立曾，熊仕强.HPLC法测定雷公藤多苷中雷公藤内酯甲的含量［J］.中国药品标准，2007(4):38－40.

［24］库尔班江，赛德艾合买提，张 焱.雷公藤制剂中雷公藤红素的高效液相色谱法测定［J］.新疆师范大学学报:自然科学版，2008(4):42－45.

［25］吴 霞，黄文华，郭宝林.雷公藤制剂中雷公藤红素的含量研究［J］.中国中药杂志，2009(7):836－838.

［26］罗晓玲.HPLC－ELSD法在中药质量分析中的应用研究［D］.杭州:浙江大学，2007.